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液相色谱（LC）

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主题：【求助】求组：如何利用前处理把PBS样品中的盐去掉。

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发表于：2024/06/19 17:09:41 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

求组！求组！求组！我要检测的样品是PBS样品，流动相为100%甲醇，我原本的前处理是100μL的PBS加300μL的乙腈去沉淀，然后吸取全部上清液进行氮吹，最后用400μL的甲醇复溶氮吹后的样品，最后过0.22的膜进行上机检测。但是这样子上机检测，样品中的盐并没有完全去掉，进而导致仪器压力不断上升，堵塞仪器。
然后我发现一个性质，我采用100μL的PBS溶液，加入300、400、500、600、700、800、900μL的甲醇去沉淀，发现中间的500μL甲醇以及600μL甲醇沉淀过后，是整个环境是呈现混浊液体，其他300、400、700、800、900μL甲醇沉淀过后，液体环境并没有很混浊，因为甲醇中也是可以溶解一定量的盐的。
最后，我采用了过小柱的方法进行盐除去，发现重复性并不良好。
我的PBS配置方法（14.11g磷酸氢二钾、2.59g磷酸二氢钾、1.99g氯化钠定容于1L超纯水中）
希望大家能帮我想想办法，解决问题，谢谢大家

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2024/6/20 10:09:07 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

赛默飞的脱盐柱了解一下

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2024/6/20 11:45:35 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果样品中含有盐，可以采取以下方法进行处理：
1.脱盐处理：
使用脱盐柱（如PD-10脱盐柱）或者脱盐离心管（如Zeba Spin脱盐柱）将样品中的盐去除。这些方法通过凝胶过滤将大分子蛋白与小分子盐离子分离，从而达到去除盐的目的。
2.沉淀法：
使用酒精沉淀、氯仿甲醇沉淀等方法将蛋白沉淀下来，然后用去离子水或者盐浓度较低的缓冲液重悬。这可以在一定程度上降低样品中的盐含量。
3.逆相色谱法：
采用高效液相色谱（HPLC）进行蛋白的分离与纯化。逆相色谱法可以有效地去除样品中的盐分，并对蛋白进行纯化。这种方法适用于具有高度选择性和分辨率要求的样品处理。
4.离子交换色谱法：
通过离子交换色谱法，可以利用蛋白与离子交换树脂间的静电作用来分离蛋白和盐。这种方法既可以降低样品中的盐含量，也可以对蛋白进行纯化。
5.拔针法：
在质谱前处理过程中，可以采用拔针法（ZipTip）对样品进行去盐。拔针法是一种便捷、快速的微量样品处理方法，通过小型逆相色谱柱进行去盐和浓缩。

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