【GB/T 17406—1998】
食品中植酸的测定
前 言
本标准系在参考国内外有关资料的基础上,吸取
离子色谱-柱后反应-分光光度法与离子交换-消化比色法的优点,经系统研究制定出来的。本法灵敏、精确、快速、操作简单,适用于一般实验室常规检验。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草;中国食品发酵工业研究所参加起草。
本标准主要起草人:刘胜杰、曲宁、元晓梅、蒋明蔚。
本标准由卫生部委托卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
1 范围
本标准规定了用离子交换分离,分光光度法测定食品中的植酸含量。
本标准适用于谷类、豆类、坚果及块茎类食品。
2 原理
用阴离子交换树脂将植酸和植酸盐吸附,使之与无机磷及其盐类等杂质分离,用氯化钠溶液洗脱,洗脱液中的植酸与三氯化铁-磺基水杨酸混合液作用,产生褪色反应,植酸含量与褪色程度成正比,用分光光度计在波长500nm处测定吸光度,计算样品植酸含量。
3 试剂
本方法所用试剂纯度均为分析纯,实验用水为蒸馏水,以下简称为水。
3.1 30g/L氢氧化钠溶液。
3.2 0.7mol/L氯化钠洗脱溶液。
3.3 0.05mol/L氯化钠洗涤溶液。
3.4 100g/L硫酸钠-盐酸提取溶液:称取50g无水硫酸钠溶于1.2%盐酸溶液,并定容至500mL。
3.5 三氯化铁-磺基水杨酸反应溶液:称取1.5g三氯化铁和15g磺基水杨酸,加水溶解并定容至500mL。使用前以水稀释10倍。
3.6 植酸标准溶液:
称取1.7347g植酸钠标准品(纯度98%),精确至0.0001g。加水溶解并定容至100mL。使用前,吸取5mL用水定容至500mL,其浓度为0.1mg/mL。
3.7 阴离子交换树脂:AG1-X4(100~200目)。
4 仪器与设备
4.1 分光光度计。
4.2 离子交换柱:φ0.8cm×10cm。
5 试液的制备
5.1 提取:称取经干燥粉碎的均质样品0.5~2.0g(约含植酸8mg),精确至0.01g,置于具塞三角瓶中,加入50mL硫酸钠-盐酸溶液(3.4)50mL,振荡提取2h,过滤,收集滤液备用。
5.2 分离:将0.5g阴离子树脂(3.7)湿法填装于交换柱(4.2)中,用氯化钠溶液(3.2)洗脱交换柱,再用水洗涤交换柱至无氯离子。取5~10mL样品提取液(5.1),加1mL氢氧化钠溶液(3.1),补加水至总体积30mL,混匀后倒入离子交换柱中。然后分别用15mL水和氯化钠洗涤溶液(3.3),以1mL/min的流速洗涤交换柱,弃去洗涤液。最后用氯化钠洗脱溶液(3.2)洗脱交换柱,收集于25mL刻度具塞试管中,并定容至刻度。
6 分析步骤
6.1 工作曲线的制作:精确吸取植酸标准溶液(3.6)0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL于六只10mL比色管中,用水补足至5mL,加入反应溶液(3.5)4mL,摇匀,以3000r/min转速离心10min。放置10~20min后,将上层液倒入1cm比色皿中,于500nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,植酸含量为横坐标,绘制工作曲线(见图1)或计算回归方程。
(图略)
6.2 试液测定:取洗脱液(5.2)5mL,(约含植酸0.3mg)于10mL比色管中,加入反应溶液(3.5)4mL,摇匀,其余步骤同6.1条,测其吸光度值,并在工作曲线上查得或从回归方程计算出试液中植酸含量。
7 结果
7.1 样品中植酸含量按式(1)计算:
式中:X——样品中植酸含量,mg/g;
c——样液含植酸量,mg;
m——样品的质量,g;
V1——提取液定容后的体积,mL;
V2——分离后,取提取液的体积,mL;
V3——分离液定容后的体积,mL;
V4——试液测定时,取分离液的体积,mL。
8 允许差
同一实验室,同一样品的两次测定结果的相对偏差小于5%。本方法最低检出限为8.27μg/mL