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主题：【分享】电化学发光免疫检测原理动态展示

浏览0 回复16 电梯直达
wolf007_1
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发表于：2006/08/29 08:39:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被4077设置为精华；
电化学发光免疫测定（Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI）是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光（CL）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。

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2006/8/29 8:42:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
其检测原理（以TSH检测为例）：第一步：结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ + N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。

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2006/8/29 8:43:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第二步：将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。

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wolf007_1
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2006/8/29 8:44:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
下一步，蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。

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2006/8/29 8:50:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光剂 [Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。


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2006/8/29 8:51:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
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2006/8/29 14:39:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我晕啊，版主这么好的东东你都不给点奖励，55555555555555
我吐血了～～～～～～～～～～～··
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wolf007_1
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2006/10/7 14:18:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼上的什么意思？你有什么问题么？
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blue_icecream
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2006/10/18 9:53:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
狂顶，这个方向不仅仅是化学发光的发展方向，也是分析化学和多学科交叉互融的发展方向（话可能说得大了哦，呵呵）楼主的信息非常好，而且我希望得到有关这方面更多的信息，不知道能否与楼主进行沟通？ＰＰＴ非常棒，有没有完整的，并且配有文字解释说明的？
我一直做的溶液水平的传统发光体系的化学发光，电化学发光没有涉猎，就是在一开始的学习和毕业论文的文献综述里知道皮毛而已．如果电化学发光可以做到这一点，那么用传统的化学发光能不能做该实验呢？工作太忙了很久没有刹下心来想一些问题了．满眼都是眼泪啊
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wolf007_1
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2007/2/9 8:45:00 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢楼上二位的厚爱，前一段时间一直比较忙，很多资料整理不出来，最近一直在整理资料，整理好以后一定上传，大家都是做这方面工作的，互相学习，共同进步！～～～～～
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ahead35
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2010/11/17 15:50:06 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
真是好东西！
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