1 色谱柱跑干了,处理方法:将贮液瓶装入重蒸水,首先按purge键,将柱前气柱排出,若无法排出,可将色谱柱前拆下,用注射器抽吸。待柱前气体排空后,连接色谱柱,用水高低流速交替冲洗色谱柱,直至柱压稳定为止。 2.基线不稳,有静电,处理方法:检查接地是否良好。 3.峰面积变化非常大,处理方法:检查是否进样阀堵塞。 4.基线突然提高,变粗,处理方法:检查样品池能量,若低于正常值,说明检测器污染。 5.柱压变动范围较大,处理方法:多为进气泡。高低流速交替冲洗。 6.柱效或峰形突然变差,处理方法:更换预柱。 7塔板数低 :色谱柱选择不对,二次保留、峰形不好的影响 8色谱柱易变性:色说柱选择不对,二次保留的影响 9色谱柱寿命短:色谱柱选择不对,样品需预处理(PH<3或PH>7) 10保留值变化:色谱柱平衡不够,流动相比例改变 11出现新的干扰峰:初始分离不够或初始样品无代表性
选择波长要从以下几个方面考虑: 1. 检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。溶剂有强吸收后,基线抬高,减小检测的线性范围而且会加大基线噪声,对溶质的检测灵敏度下降。 2. 对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。 3. 外标法定量时,要选择被测组份最大吸收波长。 254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。 (一)涡流扩散(Eddy diffusion)流动相碰到较大的固体颗粒,就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀,有的部分松散或有细沟,则流动相的速度就快;有的部位结块或装直紧密则流就慢,多条流路有快有慢,就使区带变宽。因此,固相载体的颗粒要小而均匀,装柱要松紧均一,这样涡流扩散小,柱效率高。(二)分子扩散(Molecular diffusion)分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动,也称纵向分子扩散。要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时,如果流速太慢,被分离物质停留时间长,则扩散严重。(三)质量转移(Mass transfer)被分离物质要在流动相与固定相中平衡,这样才能形成较窄的区带。在
液相色谱中,溶质分子要在两个
液相之间进行分配,或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流速快时,转移速度慢,来不及达到平衡动相就向前移,这各物质的非平衡移动,使区带变宽。四)动相流速当流速太低时,分子扩散严重,特别是在
气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对流速作图,理论塔板高度随流速增加而急速下降,当达到最低值时,流速再加大则质量转移起主要作用,理论塔板高度又加大。在高效
液相色谱中,流速稍快影响不大,但在凝胶过滤色谱中,因为物质要渗透到凝胶内部,所以质量转移影响大,流速咖大会降低柱效率。五)固定相颗粒大小定相颗粒越小柱效率越高,对流动相流动的阻力越大,需要加大压力才能使它流动。 1、开泵后压力即升高至最高限度,经过对色谱柱前,色谱柱,色谱柱后的分段测试,确定为检测池堵塞。 2、换检测波长后,色谱峰面积比以前做的小很多,怀疑进样环或管路漏夜,经检查,排除,最后确定为,检测波长的显示值和实际值不符。 由气味、景象和声音可以发现的问题你需要运用你所有的感官去发现
液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的
液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。 A、溶剂的气味原 因 解决方法 1、漏液 1、见前 2、溅出 2、a、检查废液瓶是否已满 b、找到溅出的部位并清洗干净 B、热气味原 因 解决方法 1、仪器过热 1、a、检查并调节通风设施 b、检查并调节温度设定 c、关掉仪器,查找维修手册 C、读数不正常原 因 解决方法 1、压力不正常 1、见前 2、柱温箱问题 2、a、检查并调节设定 b、参照用户手册 3、检测器灯失效 3、更换灯 D、灯警告原 因 解决方法 1、压力超出极限值 1、a、检查是否阻塞 b、检查并调节极限值的设定 2、其它警示灯 2、见用户手册 E、警告音原 因 解决方法 1、溶剂泄漏/溅出 1、找到并解决 2、其它警告音 2、见用户手册 F、刺耳的短音或长音原 因 解决方法 1、轴承失效 1、见用户手册 2、润滑不够 2、进行恰当的润滑 3、机械故障 3、见用户手册 进样阀可能发生的问题 A、手动进样阀,转动不灵原 因 解决方法 1、转子密封损坏 1、更换或调整转子密封 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 B、手动进样阀,载样困难原 因 解决方法 1、进样阀安装不当 1、重新安装 2、定量环阻塞 2、清洗或更换定量环 3、进样器污染 3、清洗或更换进样器 4、管路阻塞 4、清洗或更换管路 C、自动进样阀,不能转动原 因 解决方法 1、无压力(或电源) 1、提供恰当的压力(电源) 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 3、进样阀安装不当 3、重新安装 D、自动进样阀,其它问题原 因 解决方法 1、阻塞 1、清洗或更换阻塞部件 2、机械故障 2、见随机维修手册 3、控制器故障 3、维修或更换控制器 HPLC柱压过高: 1.拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查; 2.把色谱柱从仪器上取下来,如果压力仍然不降,则是管路堵塞,须清洗,如果压力下降了,将柱子的进出口反过来接再仪器上,用10倍量柱体积的流动相冲洗柱子,如果柱压仍不降,再检查 3.更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明溶剂获样品中含有固体颗粒,若柱压还高,可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器 基线不稳,上下波动或漂移 1。流动相有溶解气体;用超声波脱气15-30分钟 2。单向阀堵塞,取下超声去除堵塞物 3。泵密封损坏,造成压力波动,更换泵密封 4。系统存在漏液点,确定漏液位置并维修 5。流通池内有赃物或者杂质,清洗杂物 6。柱后产生气泡,流通池出液口加负压调节器 7。检测器没有设定在最大吸收波长处 8。柱平衡慢,特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的心流动相对柱子进行冲洗 1.检测信号出现倒峰,检查检测器与主机相连接是否有松动,可以把下重新连接。 2.夏季气温高,水容易生菌,要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。 3.由甲醇换到流动相平衡时,压力先稍稍下降,然后慢慢回升,可能是混合池混合效果不好,也可能是B泵轻度堵塞。 4.色谱柱长期不用,应用甲醇冲洗2h以上后,宁上两端螺丝保存。 岛津机器易出现的毛病是: 1、压力不稳:单向阀堵塞,可拆下,用甲醇水超声; 或漏液; 管路过滤器损坏; 2、基线噪音变大:未接地线,可在检测器的外壳外接一根铁丝连地; 灯能量不足,可在funk功能中查找灯的使用时间,或拆开机器外壳,观看紫外灯的强度; 检测池污染,拆下柱子,用无体积连接器连接泵和检测器,用异丙醇小流速冲洗半个小时即可; 流动相污染或进气泡。 3、泵头有盐析出:应经常用5%异丙醇清洗柱塞杆,否则易磨损。 4、进样口漏液:可能是标准针头变形或损坏,使得进样器磨损,不好的针头应及时扔掉。