主题:【原创】凝胶色谱中的几个概念

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tianru的爸爸
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1、颗粒大小:是指凝胶颗粒在出售或使用时的直径范围,如Sephadex系列多为干胶,出售时,就有干珠直径,像Sephadex G-25细胶,其干胶直径为20-80μm,而Sephadex G-25超细胶的干胶直径为10-40μm。

2、分级分离范围(fractionation range)是指某种凝胶容许被分离物质分子量在多大范围内能得到线形分离。如Sephacryl S-200超细胶的分级分离范围为5E+3~2.5E+5(蛋白质),表明蛋白质分子量在这一范围内的物质,可以在这种凝胶中得到理想分离。分级分离范围与溶质的形状有关,如同样是上述Sephacryl S-200超细胶,如果是多糖类线形分子,其分级分离范围则是1E+3~8E+4(多糖)。

3、排阻极限(exclusion limit)又称排阻限,是指不能扩散进入凝胶颗粒内部的最小溶质分子的分子量,即能有效分离物质分子量的最大极限,一种物质分子如果其分子量大于排阻极限,就不能进入凝胶网孔内部,而不能有效地分离。如Sephacryl S-200超细胶的排阻极限是2.5E+5(蛋白质),凡分子量超过2.5E+5的球型分子都不能进入凝胶网孔内部,只能从凝胶颗粒之间的空隙流出柱外。
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tianru的爸爸
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4、得水率(water regains,wr)是指1g干凝胶吸收水分的克数。这是由于非预装的凝胶多是以干燥形式保存,故使用前需要进行吸水膨胀。每种凝胶由于结构和性质不同,其得水率也不同。如Sephadex G-25的得水率为2.5±0.3g,表示1g干凝胶膨胀时能吸收2.5±0.3g水。(相应的Sephadex G-25的命名就是其得水率乘以10而来。

5、床体积(bed volume)是指1g干凝胶吸收水分膨胀后所得到的最后体积。如Sephadex G-25的床体积是4~6ml/g,就是说,1g的Sephadex G-25干凝胶经吸收水分膨胀后最终体积应该是4~6ml。
tianru的爸爸
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6、外水体积(Vo)是指色谱柱内凝胶颗粒之间空隙的总体积。

7、内水体积(Vi)是指色谱柱内能允许极小分子到达的溶剂体积,也就是能自由分布在流动相和固定相中的溶质的洗脱体积。

8、固定相体积(Vs)是指色谱柱内固定相的体积。一般Vs=Vi-Vo。

9、洗脱体积(Ve)是指某物质从色谱柱内被洗脱出来所需的流动相的体积。
tchjiang
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Insp_40efddaf
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