主题：【原创】色谱柱的平衡和使用

色谱柱的平衡和使用
反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高（约95%）的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
如何平衡色谱柱。
平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡）。
色谱柱的再生
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法:
极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水
非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水

色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱


HPLC色谱柱的良好使用规范
1.每次使用前,用0.45um/0.22um的膜过滤流动相
2.运输中或长期保存过程中变干的色谱柱需要用甲醇/乙腈完全润湿
3.样品分离时一定要考虑溶剂对样品的溶解性及分离的影响
4.对样品要依据性质进行预处理
5.处理好PH,温度,等因素对柱子的影响
6.尽可能的使用现配的流动相,注意防止流动相长菌等不良现象发生
7.定期的用合适溶剂,合适程序对柱子进行再生
8.储存色谱柱时，应将缓冲盐置换干净，并用高比例的有机溶剂饱和色谱柱（乙腈/甲醇）
9、避免外力损伤色谱柱：弯曲、跌落或强力震动