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主题：【求助】请问在做反相高液分离酪蛋白时 基线不平 该怎么办啊？

浏览0 回复7 电梯直达
zuofangxu
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发表于：2007/11/04 16:44:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家好！帮帮忙！
  在分离酪蛋白中α－酪蛋白、β－酪蛋白、κ－酪蛋白时，流动相：溶剂A：95％乙睛＋0.1％三氟乙酸，溶剂B：100％水＋0.1％三氟乙酸！采用梯度洗脱，基线跑不平，往上飘的。应该怎么办啊？
  还有样品用流动相A：B（体积比70：30）混合溶液溶解效果也不好，这样就没法定量啊！请大家指教
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2007/11/5 18:07:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是梯度设置得不太好.做完一个梯度肯定能回到基线.可以用含水高一点的溶液溶解
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yjxia
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2007/11/6 9:02:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先你的样品溶解不好肯定有影响，可以用高比例水溶液，或是纯水溶解；其次就是你每次走梯度的post time 是多长时间？一定要保证在你进下一针前，整个体系充分平衡到初始流动相（一般都要20-30min）。
顺便问一下，你用的是什么仪器？有的仪器梯度混合装置不好，走梯度时很容易使基线发生漂移。
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老鱼
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2007/11/6 9:22:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
个人认为梯度的问题是主要的  其它的可以人为的减低
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zuofangxu
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2007/11/6 20:48:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用水溶解 试过了
还是只能溶解一部分
就是α－酪蛋白，自己分离出来的
标样都可以溶解，不知道为什么
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2007/11/6 20:52:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度时间都在2分钟左右，有很多梯度，有一个时间在34分钟！基线老往上飘！
用的仪器是岛津LC－20，自动进样！外梯度的梯度洗脱！

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xulinshou9742
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2007/11/6 22:08:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
检测波长在210nm左右是随着乙腈的量增加基线上漂，波长设在220nm以上就不会了
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chaojishuwang
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2011/11/3 17:00:42 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用的是那种柱子？
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