整理了一些Agilent关于积分事件的介绍:
点击“积分”菜单中的“积分事件”选项,或者单击上图所示的快捷图标,即可打开积分事件表,进行积分参数的修改、设置,或添加时间性的积分事件。
积分参数表的初始五行参数含义如下:
斜率灵敏度:斜率灵敏度
峰宽:峰宽灵敏度
最小峰面积:峰面积最小值
最小峰高:峰高最小值
肩峰:肩峰处理方式选择。 关闭(不识别肩峰)、斜滑(按切线方式分离肩峰)、垂直(按垂直方式分离肩峰)。
注意:“斜率灵敏度”和“峰宽”的数值改动要慎重,因为选用不同数值,将影响色谱峰起止点的识别,得到不同的峰面积,进而影响到所得定量结果的准确程度。一定要保证处理同一系列数据(各个标样数据和未知样品数据)时,这两个参数值是一致的。
“最小峰面积”和“最小峰高”仅仅是色谱峰的判断依据,其数值大小不会影响所得峰面积。
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点击“积分”菜单下的“自动积分”命令,或点击上图的自动积分图标,化学工作站即以当前色谱图为基础,自动优化积分事件表中的积分参数。如果自动积分的结果不能够满足需要,可以自行设置积分参数,重新积分。
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B版化学工作站新增加的:对所有信号均适用的积分事件表。
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“拖尾峰撇去高度比” 等于基线修正后的母峰峰高 (Hp) 与子峰峰高 (Hc) 之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行拖尾峰撇去处理。如果整张色谱图上都不需要进行拖尾撇去处理,您可以将拖尾峰撇去高度比的阈值设为0或者设成一个极高的数值。默认值为0,即不进行撇去处理。
“前伸峰撇去高度比” 等于基线修正后的母峰峰高 (Hp) 与子峰峰高 (Hc) 之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行前伸峰撇去处理。如果整张色谱图上都不需要进行前伸撇去处理,您可以将前伸峰撇去高度比的阈值设为0或者设成一个极高的数值。默认值为0,即不进行撇去处理。
“撇去峰/谷比”等于基线修正后的子峰峰高(Hc)与峰谷高度(Hv)之比。该比值必须小于用户规定的阈值,才可以进行拖尾峰撇去处理。
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“标准”:使用标准模式时,指数曲线和直线计算结合起来,为母峰和子峰提供最佳拟合。子峰的起点和终点之间将用直线或指数曲线连接起来, 撇去线下方的面积将从子峰面积中扣除,加到母峰面积中。
“指数”模式:使用指数曲线拟合模式时,将使用指数方程拟合母峰的拖尾曲线,撇去线穿过一个或多个母峰后的子峰,撇去线下方的面积将从子峰面积中扣除,加到母峰面积中。可以同时利用一个撇去曲线撇去多个子峰。第一个子峰之后的所有子峰之间用垂直线方式分隔,单独计算峰面积。
“直线”模式:直线模式和上述标准模式里的直线拟合很相似,也是将子峰的起点和终点用直线直接相连,但是子峰起点的高度没有根据母峰的斜率进行修正。撇去线下方的面积将从子峰面积中扣除,加到母峰面积中。
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基线校正:化学工作站进行积分的时候,经常会出现基线“渗透”的情况,即所画的基线穿过了色谱峰本身的曲线,给出了一部分负的峰面积。尤其是用户使用“峰谷处画基线”的功能时,经常出现这一情况。B版工作站使用新的基线跟踪方式,对基线进行了基线校正。
“经典”模式:该方式与用与A版化学工作站的基线跟踪方式相同,自动向后画基线。
“无贯穿”模式:当选择这种方式时,工作站将自动搜索基线渗透的位置,并将峰的起点和终点向峰顶点方向移动,直至没有基线渗透。移动时,先移动峰的起点至无贯穿发生,再移动峰的终点。注意:基线无贯穿方式不适用于溶剂峰及其子峰或肩峰。
“高级”模式:在高级基线跟踪模式下,积分器会自动调整峰的起点和终点位置,为峰簇重新绘制基线,去除基线渗透。多数情况下,这种模式可以给出更好、更稳定的基线,基线对斜率灵敏度的参数设置依赖性更小。使用这种模式时将用到另一个参数“峰谷比”。该参数是用于决定两个没有分离的色谱峰采用垂线分离的方式积分还是采用峰谷基线的方式积分。
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“峰谷比” (当基线校正的模式选择为“高级”模式时,此参数才生效。)
通过设置峰谷比参数,用户可以决定对两个没有实现基线分离的色谱峰进行垂线分离积分还是进行峰谷基线积分。积分器将自动计算基线修正后的较矮峰的峰高和峰谷高度的比值,如果该比值低于用户设定的阈值, 将使用垂线分离的方式对这两个色谱峰进行积分;如果该比值高于用户设定的阈值,则将使用向峰谷处画基线的方式进行两个色谱峰的积分。
先整理到着吧,其实很多东西经常用才能运用熟练,在面对一张很不理想的色谱图时,能够利用工作站提供的工具迅速而准确的处理图谱是我们LC操作者必备的能力,也是我们提高工作效率的保障,多学多练在我们探讨中共同提高~~~!
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百分比法常用于粗定量,或用于组分简单、结构相似的混合物分析,以及无法找到标准样品时的分析。
归一化法的致命缺点是需要寻找所有峰的标样、校正所有的色谱峰、计算所有色谱峰的响应因子值。
使用外标法时,必须保证进样量准确!!!除非使用手动进样器的满刻度进样模式(用定量环进样),否则不推荐利用手动进样所得数据进行外标法定量。
要求仪器必须具有良好的稳定性,而且应定期进行重新校正,否则标样的响应因子和未知样品的响应因子不相等,就无法进行准确定量。
内标法认为响应因子的比值恒定,消除了外标法对仪器稳定性和进样量的严格要求。
内标法的缺点是在标样和未知样品中都要加入内标化合物,而且引入的内标量必须相同、准确。
注意:内标法工作曲线的横、纵坐标分别为含量比和峰面积比;而外标法工作曲线的横、纵坐标分别为含量和峰面积。