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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【讨论】紫外分光光度法测定蛋白质含量de问题？

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云中漫步
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发表于：2008/04/04 17:43:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被zhouyuhu设置为精华；
实验原理
本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。

仪器与试剂
紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管
标准蛋白质溶液：5.00 mg.mL-1溶液，0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液

实验步骤
1. 标准曲线的制作 ：
        用吸量管分别吸取1.0 、1.5、 2.0 、2.5 、3.0 mL 5.00 mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液的吸光度A280，记录所得读数。
2. 样品测定：
        取待测蛋白质溶液3 mL，按上述方法测定280 nm处的吸光度。平行测定三份。

数据处理
1. 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

注意事项和问题
1. 紫外吸收法与Folin-酚比色法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？
2. 若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？
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云中漫步
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2008/4/4 17:44:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过蛋白质

酪氨酸275nm和色氨酸280nm，那么本实验测定的蛋白质应该是两者之和吗？
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初学者&九点虎
zhouyuhu
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2008/4/5 22:17:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
蛋白质是一个大类,里面还有很多细分,楼住所说的蛋白质标准溶液指什么?
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bszcb
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2008/4/5 22:22:41 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议看一下考玛斯亮蓝法的教科书
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2008/4/5 22:27:23 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 bszcb 发表:
建议看一下考玛斯亮蓝法的教科书

我们一般都用开始定单法测定粗蛋白,这种方法还真没有用过
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raynortft
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2008/4/5 22:44:38 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
标准曲线法？？
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yhsun
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2008/4/5 23:09:07 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本法是测蛋白质的粗略方法,核酸是在260nm测定.
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liu999999
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2008/4/7 8:30:08 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没见过该方法介绍。
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chaoren0657
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2008/4/7 17:41:30 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢分享~！！！
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zhuxiugao
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2008/4/7 19:08:38 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主是做食品的？
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kangfuxing
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2008/4/7 20:02:30 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个方法容易被核酸干扰，而且测定混合有机成分时，极不准确。
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