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主题：【求助】请问各位高人：测定金银花中木犀草苷含量主峰与杂志峰分不开，如何使分离度增大？

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wdl158160
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发表于：2008/07/10 16:04:39 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这几天我做金银花中木犀草苷的含量测定，按照药典方法做（以乙腈为流动相A,以0.5%冰醋酸溶液为流动相B,检测波长350nm。时间0~30分　流动相A(%) 10％→30％ ；　流动相B(%)90％→70％）用ＹＭＣ色谱柱(Ｃ１８　ODS　4.6mm×15cm),安捷伦１２００色谱仪，乙腈是迪马的，冰乙酸是色谱纯．
测出的主峰与两个杂质峰就是分不开（保留时间１６.２分），对照品走的特别好，就是样品主峰与邻近的两个杂峰（前后各一个）离的特别近，有一半都重叠到一起，我重配了流动相，换了色谱柱，重新处理了样品都不行，还是分不开．

听说要改流动相梯度才能分开，应该怎么改啊？或者有没有其他的方法？
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2008/7/10 16:18:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换长柱子，换粒径比较细的柱子
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有水有渝
xky0230699
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2008/7/10 20:32:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换25cm的柱子应该能分的开，调流动相的话就把有机相的比例降下来。
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honeymusic
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2008/7/10 21:41:27 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以帮你做做这个样品，联系我lanfeng431@126.com
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nnsss
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2008/7/11 10:04:57 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果你不改梯度条件,就只能换柱子了
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dereky
denghong2468
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2008/7/11 11:18:04 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wdl158160 发表:
这几天我做金银花中木犀草苷的含量测定，按照药典方法做（以乙腈为流动相A,以0.5%冰醋酸溶液为流动相B,检测波长350nm。时间0~30分　流动相A(%) 10％→30％ ；　流动相B(%)90％→70％）用ＹＭＣ色谱柱(Ｃ１８　ODS　4.6mm×15cm),安捷伦１２００色谱仪，乙腈是迪马的，冰乙酸是色谱纯．
测出的主峰与两个杂质峰就是分不开（保留时间１６.２分），对照品走的特别好，就是样品主峰与邻近的两个杂峰（前后各一个）离的特别近，有一半都重叠到一起，我重配了流动相，换了色谱柱，重新处理了样品都不行，还是分不开．

听说要改流动相梯度才能分开，应该怎么改啊？或者有没有其他的方法？

除了改变柱子的粒径和长度之外，你还可以把比例变化的时间增长一点。可以改到50分钟，使比例变化率减小一点。多尝试一下，寻找到峰的位置变化规律以后就好办了！
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ysh_feng
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2008/7/15 13:57:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
江苏汉邦科技有限公司有这个品种的图谱数据库,可以联系他们.0517-833995801/02/03
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ysh_feng
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2008/7/15 13:58:16 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ＹＭＣ色谱柱(Ｃ１８　ODS　4.6mm×15cm),
YMC柱子是进口里面比较便宜的,自然性能就没有那么明显,江苏汉邦的柱子完全可以分开你说的物质
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wdl158160
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2008/7/16 13:44:43 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢各位的建议和帮助,我又做了几次试验,把流动相的梯度调小了,乙腈减少了,分离度果然增大了,我现在用的还是原来的系统和试剂,梯度变成:时间0~45分　流动相A(%) 6％→20％ ；　流动相B(%)94％→80％  。杂质峰已经基本分开,分离度刚好1.5 , 我想要有这个系统继续加大分离度,使分离完全,就得再减少乙腈,我还想请教大家,乙腈减到5%以下,水相太多,对系统和柱子有没有影响啊?
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wdl158160
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2008/7/16 13:46:16 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ysh_feng 发表:
江苏汉邦科技有限公司有这个品种的图谱数据库,可以联系他们.0517-833995801/02/03


谢谢你提供的电话，我会联系的。
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roland2008
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2008/7/16 13:47:53 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主自己早到解决问题方法,不错呀
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