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主题：【求助】蛋白质沉淀和水解蛋白质结合物的应用规则

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lishupinmong
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发表于：2008/10/20 19:53:22 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 未解决
在前处理中，内脏组织大多杂质很多，需要沉淀蛋白质，沉淀后离心，提上清夜再萃取，但内源性物质中的待检物同时也会和蛋白质成结合状态，需要水解，再萃取。所以请问如果我先沉淀了蛋白，那么会不会把成结合状态的待检物一同沉淀，损失待检物。在运用中如何处理蛋白质杂质和蛋白质结合物的前处理问题？
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2008/10/21 10:36:19 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lishupinmong 发表:
在前处理中，内脏组织大多杂质很多，需要沉淀蛋白质，沉淀后离心，提上清夜再萃取，但内源性物质中的待检物同时也会和蛋白质成结合状态，需要水解，再萃取。所以请问如果我先沉淀了蛋白，那么会不会把成结合状态的待检物一同沉淀，损失待检物。在运用中如何处理蛋白质杂质和蛋白质结合物的前处理问题？

如果你的待检物与蛋白质一起结合，那你要是直接先沉淀蛋白，肯定会把待检物沉淀掉的，造成回收率下降。
可以用破坏待检物与蛋白质形成结合物的试剂来减少待检物的沉淀损失；也可以直接萃取，再去除杂质。
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lishupinmong
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2008/10/21 20:08:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
和蛋白质结合状态的待检物直接萃取是萃取不出来的，否则到不用水解了。萃取只能把游离状态的物质萃取出来。虽然我的的想法是先水解再沉淀蛋白，这样萃取率就高了，可看了很多文献都是要么沉淀蛋白，要么水解，选其一，好象是并列，选择。列如苯二氮类的安眠药中毒，学样中药物结合率高达70%，书上介绍了蛋白质沉淀法和水解法，我在想如果用沉淀法，那结合的药物其不是损失了？请指教
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liu999999
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2008/10/21 20:41:49 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
LZ多虑了，沉淀也是可以的。
    加入沉淀剂使蛋白质沉淀应该是在定容状态下进行的，这样沉淀所含的待测无成分浓度与溶液中的浓度是达成平衡的，通过离心或过滤测定上清液中待测物的浓度，按照定容体积计算，不会损失待测物的含量的。
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