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凝胶色谱（GPC）
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主题：【讨论】选用不同分子量的GPC标样（PS）可造成检测结果相差五六千？

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kairy
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发表于：2008/12/13 23:22:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们一直用PS聚苯乙烯做GPC的窄标，可是最近的实验让我很疑惑：我同时（所用仪器条件都一样）进两组不同分子量的PS（为了方便理解，将其分别命名为A组A1、A2、A3、A4，B组B1、B2、B3、B4，而且A组和B组对应的分子量都很接近，也都分布在我们样品结果范围周围）和一个样品X，做完后分别用这两组标样去处理这个样品，发现处理结果竟然相差五六千（如用A组标样校正得到样品X的MW是97000，而用B组标样得到是92000，重复实验都是这样）！很是疑惑！那我应该相信哪个结果呢？
GPC是相对较正的结果，我觉得标样的这点差异不至于对结果有那么大的影响吧？而且阿我们每次购买标样都不可能是与上次分子量相同的，这样的数据不是没多大的可比性？

请求各位帮忙解惑啊！在下先感激了！
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kairy
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2008/12/14 11:01:41 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得要理清这个问题，是不是得从校正曲线入手？我们用的是次3方程（WATERS软件），用标样的Mp和RT做曲线，然后计算样品的MW，我们还严格控制标样和样品的相应值一致。为什么标样分子量差异会对检验结果有这么大的影响，有没有比较懂理论或有这方面运用的XDJM，帮忙分析分析啊。还有MP和MW是怎么换算的？
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tigertooth
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2008/12/15 9:40:17 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这很正常，GPC的结果很大程度上依赖于标样，对于9万多的分子量，两个标准曲线的结果差五、六千完全可以接受，差15%都是允许的。
标样的标定方法是不一样的，我也遇到过类似的情况，一个W的gpc随机标样，上面标称18万，可怎么做出峰都比我的20万PS标样早，我算出来是21万了。这是标样啊！
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kairy
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2008/12/17 11:41:20 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
來GPC數據的可信度真的不咋的啊
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viscotektegent
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2008/12/17 14:37:53 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kairy 发表:
來GPC數據的可信度真的不咋的啊


你可以根据你的样品的分子量的大致范围，来用一些与之相匹配的标样来作标准曲线。例如：象你这个样品只有9万、10万的，那么作标准曲线时，就别用太大的标样，而多用几个几万、十几万的，这样可能会好些。
传统的GPC，数据的影响因素很多，所以偏差大也是在所难免的。其实你做的还可以啦，很不错了。说明你的仪器也不错，系统状态也比较好，柱效还不错。等你的柱子柱效下降时，可能更不好呢。
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2008/12/17 16:52:30 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得你可以用已知分子量的标准物质来做未知样品，用你所做好的标准曲线，看看结果是否能和你的已知相符合。
这样，你的两条工作曲线都能有验证。
再就是GPC本身就有误差，一般在10%以内就可以认为正确。
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kairy
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2008/12/23 8:47:38 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 viscotektegent 发表:
原文由 kairy 发表:
來GPC數據的可信度真的不咋的啊


你可以根据你的样品的分子量的大致范围，来用一些与之相匹配的标样来作标准曲线。例如：象你这个样品只有9万、10万的，那么作标准曲线时，就别用太大的标样，而多用几个几万、十几万的，这样可能会好些。
传统的GPC，数据的影响因素很多，所以偏差大也是在所难免的。其实你做的还可以啦，很不错了。说明你的仪器也不错，系统状态也比较好，柱效还不错。等你的柱子柱效下降时，可能更不好呢。


因為樣品是寬分布，Pd在3左右，樣品是9萬，那它出峰起始段可能會落在几十萬分子量處，末尾可能在几千處。
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kairy
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2008/12/23 8:50:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我們打算以后盡量選用相同分子量的PS來校正，以避免由于PS的不同導致結果的差異，謝謝各位熱心幫助！
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nnsss
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2008/12/23 12:51:59 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
误差是很大的,但是需要有一个标准就可以,就是大家承认即可,另外有可以测绝对分子量的仪器
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polylactic
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2009/5/16 15:36:49 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
呵呵，那就用绝对的
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lwlwb
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2009/5/18 12:18:54 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kairy 发表:
我們打算以后盡量選用相同分子量的PS來校正，以避免由于PS的不同導致結果的差異，謝謝各位熱心幫助！


你说的是峰尖分子量么？如果是峰尖分子量，跟你的柱子的分辨率有关系；如果是重均或数均，则跟你的检测器的灵敏度有关系，也就是你的峰起点和峰落点选择是否重现。

另外，90000多的分子量差5000，已经在10%之内，应该还是比较理想的。
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