主题：【原创】【极限体验】Ultimate XB-C18柱系列体验之从TLC到HPLC

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幽灵龙猫

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发表于：2012/06/01 13:46:10 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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Introduction
首先对自己这么长时间离开极限色谱版做个检讨，其次对透支的极限体验贴姗姗来迟表达歉意。不找任何借口啦，觉得非常对不起小S。
最近对论文进行最后的补充，也是在试图寻找一些自己没有分离得到的化合物，就找到这么一个流分，样品一共有20g，还是很大量的，在用硅胶薄层摸索好条件以后，过了一个硅胶柱，得到14个子流分，通过聚酰胺薄膜进行检测对这14个子流分进行合并，如图1。最后合并得到4个主要的流分，分别各取20 mg 各用2 mL甲醇溶解(实物见图2)，进样分析。
再在这里补充一点，本帖其实可以用一句话来说明：薄层色谱在初期是可以使用的，要想知道一个流分的真实组成，还得依靠相对先进的HPLC，当然是配备了出色的色谱柱(Ultimate XB-C18)的HPLC。
1.Materials
色谱甲醇(Fisher)，去离子水(Eyela Still Ace, SA-2100 E1, 日本）,三氟乙酸(TFA,Dima)。
2.HPLC-DAD analysis of target fractions
Waters 高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱系统，由Waters Model 600 controller液相色谱，Millennium 32 工作站，Model Delta 600 泵，以及Waters 996 DAD检测器组成。
色谱柱：Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm)
流动相：A通道：甲醇，B通道：水(0.05% TFA)
流速：A通道65%；B通道35%
柱温：30℃
检测波长：190-400nm扫描
进样量：10μL
3.Results
图1.聚酰胺薄膜和硅胶GF254薄层检测结果

图2.样品实物图

图3.HPLC chromatograms of sample S-9-1,S-9-2,S-9-3,and S-9-4
4.Discussion
(1) 就流分S-9-1而言，无论是聚酰胺薄膜还是硅胶薄层，检测结果都是3-4个成分。令人吃惊的是，本来感觉很简单的一个流分，确实4个流分中最复杂的一个，HPLC-DAD结果显示该流分含至少6个成分。
(2) S-9-1流分显示了两个紫外吸收与众不同的色谱峰，分别在保留时间为13.601和17.731处。这两个化合物未分离得到，为下一步重点分离对象。
(3) S-9-2在TLC上显示2个斑点，在HPLC-DAD色谱图上也显示两个色谱峰(图3)，相一致。
(4) S-9-3，S-9-4这两个流分的主要成分与S-9-2相同，且均已得到，但在保留时间为12分钟附近各有一个成分，紫外吸收显示，二者不同，也列为下一步重点分离对象。
(5) 最后再说一点，该分析柱已有半年未使用，昨天拿出来直接用65%的甲醇水平衡，进行分析。结果显示了和之前一样正态的峰形。该条件下，各色谱峰峰形卓越，且均达到基线分离。工作站不能导出谱图，所以采用截图的方式，分辨率略低。