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主题：【原创】我的经验之谈【xuchen666、suyirumo、团结推荐原创】

浏览0 回复61 电梯直达
三人行
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发表于：2013/01/22 23:14:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

不轻易外传的经验



如果我不说，你知道吗？

大家都清楚普通C18的色谱柱pH使用范围大约在2～8之间，那么要长期使用的流动相中缓冲液的pH值偏碱，你会怎样延长色谱柱的使用寿命？

下面来说说我是怎样发现这个秘密的。

那是好几年前的事了，做的是三磷酸腺苷二钠注射液的课题，当时领导催得急，时间紧任务重，可是屋漏偏逢连阴雨，色谱柱三天两头地出问题，这是什么原因呢？

先介绍一下三磷酸腺苷二钠的色谱条件：

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基键合硅胶为填充剂；以0.2mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠35.8g，磷酸二氢钾13.6g，加水900ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入四丁基溴化铵1.61g，加水至1000ml，摇匀）-甲醇（95:5）为流动相；柱温为35℃；检测波长为259nm；理论板数按三磷酸腺苷二钠峰计算应大于1500；各色谱峰的分离度应符合规定。出峰次序依次为一磷酸腺苷钠、二磷酸腺苷二钠与三磷酸腺苷二钠。

如此浓的的缓冲盐，如此少的有机相，什么色谱柱能受得了啊。于是我英明地决定用以前别人报废的色谱柱，进行了适当的修补，用它来做这个不讨人喜欢的课题。刚开始做的图谱不错，柱效也很高。可是没用几天就不行了，柱效下降得很快，峰高几乎到了原来的一半，我还以为是盐太浓色谱柱污染了，于是清洗柱塞板，换柱头填料，忙活了半天没起什么作用。痛苦啊！

在煎熬中思索，忽然灵机一动，是不是因为缓冲盐的pH值偏高，色谱柱耐不住。于是想到用pH3.5的甲醇水（甲醇-水（20:80）用冰醋酸调节pH至3.5）来冲洗色谱柱，结果色谱柱的柱效恢复了，一些又正常了。

这样每次做完试验，我先用5%的甲醇水冲洗系统，再用pH3.5的甲醇水（甲醇-水（20:80）用冰醋酸调节pH至3.5）冲洗色谱柱约40分钟，然后再用甲醇水冲洗系统，最后用甲醇保存，就这样我的课题在规定的时间内OK了。

这个经验算不算宝贵财富呢?
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xuchen666
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2013/1/22 23:32:16 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很好的原创，这个经验很有用啊。
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三人行
jncxyy2012
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2013/1/22 23:49:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xuchen666(xuchen666) 发表:
很好的原创，这个经验很有用啊。


后来有做过一个产品，流动相缓冲盐pH值是7.5。虽然用的是碱基柱，偶尔也会出问题，用上述方法处理好多了，非常管用。
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yuduoling
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2013/1/23 8:23:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
经验之谈啊
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dahua1981
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2013/1/23 8:29:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
经验是花钱买不来的东西
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【四季风】
gpwrx
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2013/1/23 8:33:39 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
爱动脑筋和善于发现问题的“三人行”。好经验!
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suyirumo
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2013/1/23 8:57:02 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很好的经验之谈啊，果然专家一出手，就知有没有
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suyirumo
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2013/1/23 8:58:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三人行老师，我有个问题：
之前挺前辈们说，pH过高，对色谱柱的影响是会溶解硅胶，造成填料流失，
这时用酸冲洗还能恢复回去吗？
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happydog2004
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2013/1/23 8:59:40 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了，今后使用色谱柱的时候也注意。
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三人行
jncxyy2012
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2013/1/23 9:38:48 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 suyirumo(suyirumo) 发表:
三人行老师，我有个问题：
之前挺前辈们说，pH过高，对色谱柱的影响是会溶解硅胶，造成填料流失，
这时用酸冲洗还能恢复回去吗？


我也记得相对于酸来说，色谱柱更不耐碱，pH值不能超过色谱柱的使用范围，每次做完样及时处理，应没问题的。
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suyirumo
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2013/1/23 9:44:21 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
原文由 suyirumo(suyirumo) 发表:
三人行老师，我有个问题：
之前挺前辈们说，pH过高，对色谱柱的影响是会溶解硅胶，造成填料流失，
这时用酸冲洗还能恢复回去吗？


我也记得相对于酸来说，色谱柱更不耐碱，pH值不能超过色谱柱的使用范围，每次做完样及时处理，应没问题的。


下次再遇到这种实验试一下，其实无论是用酸性、碱性，甚至是中性盐溶液做流动相，用完之后都应该及时将色谱柱冲洗干净，保存在有机相中
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