主题：【分享】奶粉中双氰胺的检测方法 （HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）

北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
本文采用天津博纳艾杰尔科技的Cleanert^® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil^® HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料
高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。
双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），Cleanert^® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil^® HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。

1.2 实验步骤
提取、净化：称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加入Cleanert^® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22µm滤膜，待测。

1.3　实验条件
1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）：
色谱柱：Venusil^® HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）；
流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10: 90；
波长：220nm；进样量：10µl；柱温：30℃；流速：1mL/min。
1.3.2 LC-MS/MS法：
（1）色谱条件：
色谱柱：Venusil^® HILIC（ 5μm，100Å，2.1*150mm）；
流动相： 0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min。
（2）质谱条件：
质谱仪：API 4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。

2.结果与讨论

2.1 高效液相色谱法：

2.1.1线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL，2.0µg/mL，5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2：

2.1.2检测方法稳定性考察
选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3：

2.1.3准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4

2.2 LC-MS/MS法

2.2.1线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液。
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表5：

2.2.2 检测方法稳定性考察
选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表6：

2.2.3准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。

3 产品订货信息



优化方法：

婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS/MS法）[/url]