主题:【求助】液相换了新预柱和色谱柱,第二天就出问题了,大家帮帮忙!!!急急急……

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fannis
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    刚买的C18亲水新柱子,第一天跑样很正常,纯甲0.2流速1.18MPa,1流速5.90MPa,很正常。跑了大概10个样,进样前都是经过了滤膜的,关机器,第二天来的时候,用纯甲醇走,1流速柱压7.08,这个还在正常范围内吧,新柱子用了下柱压高了一点还能接受,梯度以80%甲醇50甲醇,这个时候中途离开了一下,柱压飙到22MPa,我滴个神,这可是刚买的柱子啊,要是再出问题导师还不弄死我,取下色谱柱后(预柱未取下)纯甲醇1流速柱压6.多,但是这样跑了几分钟后柱压神奇般的又降下来了,到了1.多,等装上柱子后,晕0.2、0.4、0.6、0.8、1.0柱压分别为1.4、2.8、5.4、7.8和12.多,这个压力完全不正常。
    今天又冲了一天柱子,情况差不多,甲醇的时候柱压还可以,过度到水期间柱压高很多,将近20mpa(流速一直1ml/min),纯水时16.多mpa,取下色谱柱后(预柱未取下)和昨天一样的情况刚开始压力6点多,紧接着压力很快就将下来了,到1.多,这个机器到底是怎么个情况呢??

    每天溶液基本上都过滤超声,最多也就是两天换一次,跑液相这三个来星期基本上都是在处理这机器了,期间换了好像5个预柱,我绰号都叫“预柱杀手”,有时候我都还没进样呢,只是冲柱子压力就飙高,就要换预柱了,而且实验室平均一年要换好几根柱子,这是我们操作不当吗,我是研一还是新手,大神们能不能帮帮小弟呀呀,跑了液相心力交瘁……
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这个肯定是液路有堵塞的地方,一般两个问题,
1.确定是色谱柱的压力高了吗?有没有可能是液路中的某一个地方堵塞造成的压力上升
2.色谱柱的筛板堵塞,进液口的,拆下来清洗吧
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fannis
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原文由 houjjun(houjjun) 发表:
这个肯定是液路有堵塞的地方,一般两个问题,
1.确定是色谱柱的压力高了吗?有没有可能是液路中的某一个地方堵塞造成的压力上升
2.色谱柱的筛板堵塞,进液口的,拆下来清洗吧
我用1ml/min流速走纯水,17MPa,不接色谱柱的话是7.多,柱子可能稍微有那么一点堵我感觉,预柱和色谱柱都不接的话大概压力在0.5左右,前两天维修人员已经来清理过了,当时记得只有0.05,现在0.5,哎,也有点升高了,现在总是接二连三的换预柱,总觉得有问题,但是又不知道,这个月换了5个预柱,一根柱子,现在想就是想早点结束啊,有点苦逼
三人行
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remioromen
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原文由 fannis(v2699022) 发表:
    刚买的C18亲水新柱子,第一天跑样很正常,纯甲0.2流速1.18MPa,1流速5.90MPa,很正常。跑了大概10个样,进样前都是经过了滤膜的,关机器,第二天来的时候,用纯甲醇走,1流速柱压7.08,这个还在正常范围内吧,新柱子用了下柱压高了一点还能接受,梯度以80%甲醇50甲醇,这个时候中途离开了一下,柱压飙到22MPa,我滴个神,这可是刚买的柱子啊,要是再出问题导师还不弄死我,取下色谱柱后(预柱未取下)纯甲醇1流速柱压6.多,但是这样跑了几分钟后柱压神奇般的又降下来了,到了1.多,等装上柱子后,晕0.2、0.4、0.6、0.8、1.0柱压分别为1.4、2.8、5.4、7.8和12.多,这个压力完全不正常。
    今天又冲了一天柱子,情况差不多,甲醇的时候柱压还可以,过度到水期间柱压高很多,将近20mpa(流速一直1ml/min),纯水时16.多mpa,取下色谱柱后(预柱未取下)和昨天一样的情况刚开始压力6点多,紧接着压力很快就将下来了,到1.多,这个机器到底是怎么个情况呢??

    每天溶液基本上都过滤超声,最多也就是两天换一次,跑液相这三个来星期基本上都是在处理这机器了,期间换了好像5个预柱,我绰号都叫“预柱杀手”,有时候我都还没进样呢,只是冲柱子压力就飙高,就要换预柱了,而且实验室平均一年要换好几根柱子,这是我们操作不当吗,我是研一还是新手,大神们能不能帮帮小弟呀呀,跑了液相心力交瘁……


楼主是做中药的吗?
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一因为甲醇:水(50:50)时的粘度系数最高,所以此时的压力是甲醇水体系最高的。
fannis
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原文由 elflame(v2676787) 发表:
一因为甲醇:水(50:50)时的粘度系数最高,所以此时的压力是甲醇水体系最高的。
这个是知道的,只是磷酸盐跑着跑着压力就升高了,我感觉是预柱跑磷酸盐压力升高,这是因为预柱堵了呢,还是预柱也有亲水不亲水之分,因为我用的这个不是亲水性的预柱,所以很容易就给堵额,一般3天,预柱压力就猛增了
fannis
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原文由 remioromen(remioromen) 发表:
原文由 fannis(v2699022) 发表:
    刚买的C18亲水新柱子,第一天跑样很正常,纯甲0.2流速1.18MPa,1流速5.90MPa,很正常。跑了大概10个样,进样前都是经过了滤膜的,关机器,第二天来的时候,用纯甲醇走,1流速柱压7.08,这个还在正常范围内吧,新柱子用了下柱压高了一点还能接受,梯度以80%甲醇50甲醇,这个时候中途离开了一下,柱压飙到22MPa,我滴个神,这可是刚买的柱子啊,要是再出问题导师还不弄死我,取下色谱柱后(预柱未取下)纯甲醇1流速柱压6.多,但是这样跑了几分钟后柱压神奇般的又降下来了,到了1.多,等装上柱子后,晕0.2、0.4、0.6、0.8、1.0柱压分别为1.4、2.8、5.4、7.8和12.多,这个压力完全不正常。
    今天又冲了一天柱子,情况差不多,甲醇的时候柱压还可以,过度到水期间柱压高很多,将近20mpa(流速一直1ml/min),纯水时16.多mpa,取下色谱柱后(预柱未取下)和昨天一样的情况刚开始压力6点多,紧接着压力很快就将下来了,到1.多,这个机器到底是怎么个情况呢??

    每天溶液基本上都过滤超声,最多也就是两天换一次,跑液相这三个来星期基本上都是在处理这机器了,期间换了好像5个预柱,我绰号都叫“预柱杀手”,有时候我都还没进样呢,只是冲柱子压力就飙高,就要换预柱了,而且实验室平均一年要换好几根柱子,这是我们操作不当吗,我是研一还是新手,大神们能不能帮帮小弟呀呀,跑了液相心力交瘁……


楼主是做中药的吗?


是不是因为用柱子太狠了??
yzulcl
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看起来像是预柱的上游有颗粒之类的东西在流路里面,所以刚换上新预柱的时候压力正常;跑一段时间预柱就被颗粒堵了。

从流动相开始一个一个检查清洗试试吧:流动相在使用之前过滤膜了吗?溶剂瓶里面的滤头是不是该清洗或更换?泵的柱塞杆密封圈有磨损掉碎屑吗?进样六通阀是不是脏了呢?总之该洗的洗该换的换看看吧。

还有一个低级错误你有没有犯:流动相里面含有盐(比如磷酸盐),用完了直接用甲醇冲洗会导致盐析出,从而堵柱子。反过来,柱子里面原来是用的100%甲醇,直接用含有磷酸盐的流动相冲洗平衡也有可能导致盐析出。盐析出的位置很多:管路里面、泵腔里面、比例阀(如果是四元的)里面、色谱柱里面……正确的做法是用不含盐的并且至少含有50%的水的流动相冲洗过渡。
该帖子作者被版主 jncxyy20124积分, 2经验,加分理由:积极应助
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