主题：【第六届原创】含齐墩果酸中药制剂含量测定方法研究

含齐墩果酸中药制剂含量测定方法研究

    齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)是五环三萜类化合物，为一种天然产物化学成分，广

泛分布于植物界，如在木樨科女贞子、龙胆科青叶胆、五加科木忽木、白花蛇舌草、

山楂、丁香、大枣、枇杷叶、夏枯草等植物中[1]，OA以游离或结合成苷的形式存

在。自20世纪70年代该药用于治疗肝炎以来，不断发现新的药理作用，临床上得到

广泛应用，引起普遍重视，并进行了深入研究。

1 理化性质

    OA为五环三萜类化合物，化学名为(3B)-3-Hy-droxyolean-12-en-28 -oicacid，分子式

为C30H48O3，为白色簇状针晶，无色、无味、无臭、不溶于水，可溶于乙醇、氯

仿、乙醚、丙酮等。熔点:310℃,比旋度:[A]12D+ 79.50(氯仿中)[2]。

2 药理作用

    实验研究发现，OA可使变性坏死的肝组织恢复正常来减轻丙氨酸活力下降、肝

组织炎症反应减弱、血中丙种球蛋白下降，并能促进肝细胞再生，使坏死区迅速修复

[3]。齐墩果酸预防抗结核药物肝损害88例临床观察发现,齐墩果酸可有效地预防抗结

核药物对肝脏的损害[4]。OA还有降糖作用[5]。刘秀英等研究发现齐墩果酸对镉中

毒肾损害有改善作用[6]。马超美等研究证明齐墩果酸丙二酸半酯具有很强的抑制

HIV-PR的作用[7]。体外试验表明，齐墩果酸可抑制肿瘤生长[8]，还可能有抗突变

的作用[9]。另有实验研究表明，齐墩果酸对Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型变态反应都具有明显抑制

作用[10]。还有报道OA增强机体免疫功能等作用 [11]。

3 含量测定方法

    药材OA含量分析以及工艺设计的选择和产品检验都离不开含量测定。用于OA的

含量测定方法很多。较早应用比色法、中和法，操作复杂，显色误差较大，对酸性杂

质无分辨力和选择性，所以近年来已少应用。薄层扫描法应用广泛，高效液相

(HPLC)法有操作快速和准确性高的优势，正在取代其它方法。现将各种方法具体介

绍如下：

    李显奇等[12]采用Nova-Pak C18柱(3.9mm×150mm ID,4μm)；流动相为甲醇-水

(9∶1)；检测波长:230nm；灵敏度：0.05AUFA；流速：1.2ml/min；柱温：(20±1)℃对

经过酒蒸、酒炖、醋蒸、盐炙及盐蒸等炮制方法的女贞子不同炮制品中的齐墩果酸进

行了含量测定，结果表明其含量大小依次为酒炖品>酒蒸品>醋蒸品>盐水蒸品>盐炙

品>生品。

    用高效液相法对不同产地的30个样品进行含量测定，结果表明不同产地的女贞

子中齐墩果酸含量(mlg生药)不同，以广州和呼和浩特两地样品含量最高，分别为

14.84%和14.67%。用此法还对9种中药材中的齐墩果酸的含量进行测定，结果表明，

醇提法以女贞子中的OA含量最高，为6.66%；酸解提取法，同样以女贞子中的OA含

量最高，为7.8%[13]。

    陈桂云[14]等采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器，Luna C18(4.6×

250mm,5μm)色谱柱，柱温30℃；乙腈-水(88∶12)为流动相，流速：1.0mL/min；漂移

管温度90℃，氮气流速：2.30L/min测定齐墩果酸片含量，供试品液制备：取供试品20

片精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于齐墩果酸20mg)置50mL量瓶中，加

甲醇约40mL，超声溶解40min，放冷，加甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作

为供试品溶液。齐墩果酸在0.21~4.16μg之间线性关系良好，r=0.9997(n=8)；回收率

为99.24%。           

    冯瑜[15]等同法测定藏药翼首草中齐墩果酸是采用Hypersil ODS2 (4.6mm×

250mm,5μm)色谱柱，柱温35℃，甲醇-0.5%冰醋酸(88:12)为流动相，流速1ml/min；蒸

发光散射检浏器检测，漂移管温度85℃，氮气压力48psi。结果齐墩果酸在

0.226~2.26μg范围内(r=0.9996)线性关系良好，平均加样回收率为102.3%。

    赵永席[16]等用Phenomenex C18(250mm×4.6mm id.,5μm)色谱柱，流动相为甲

醇-0.5%(体积分数)冰醋酸水溶液(体积比为87∶13)，流速0.8mL·min-1，柱温为室

温；蒸发光散射检测器漂移管温度65°C，载气(N2)流速2.0L·min-1，撞击器关闭。

结果齐墩果酸进样量为1.28~3.84μg(r=0.9985)时线性关系良好，其检出限为

0.64μg (按S/N=3计)，平均回收率为96.8%。

    邹盛勤[17]运用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法，Nova-Pak C18色谱

柱，流动相为乙睛-水(65∶35)，流速0.8ml/min，检测波长210nm，柱温25℃。样品溶

液制备：精密称取齐墩果酸原料8.2mg,置于10ml容量瓶中，溶解后用甲醇定容，摇

匀；取齐墩果酸片10片，精密称定，在玛瑙研钵中充分研磨，精确称取样品28.6mg，

置于10h容量瓶中，加入9ml甲醇，超声提取1.0h，用甲醇定容，摇匀，离心后经

0.45μm微孔滤膜过滤，制得。测得齐墩果酸原料及片剂中齐墩果酸在3.48~17.4μg范

围内线性关系良好(r=0.9999)，检出限为0.3mg/L(3σ)，平均回收率为99.5%。

    江铁军[18]用SPE-RP-HPLC法测定女贞子中齐墩果酸含量，用KromasilKR100-

5 C18(4.6mm×250mm,5μm)柱，流动相：[乙腈-甲醇(体积比1∶1水(体积比90∶10))；

流速：0.8mL/min；检测波长：210nm；柱温25℃；进样量：2μL。结果齐墩果酸在

0.108~3.24μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率为100.50%，含量为

0.639~1.340mg/g。

    徐敏[19]等用RP-HPLC法测定不同产地青叶胆中齐墩果酸的含量色谱柱为

PhenomsilC18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-水-冰乙酸(90∶10∶0.1)；

检测波长为205nm；流速为1mL/min；柱温为30℃。齐墩果酸的线性范围为

0.535~3.210μg(r=0.9997)，回收率为101.1%，且齐墩果酸的含量分布趋势是花叶中含

量较高，根茎中含量较低。

    采用反相高效液相色谱法测定，以河北产女贞子中OA含量最高，福建、江苏次之[20]。

    女贞子及其制剂中的齐墩果酸的鉴定：10%乙腈和0.010molL硼砂溶液用0.10molL

的盐酸调节pH到7.50为缓冲溶液。研究pH值作用的影响和调节剂在齐墩果酸的迁移

活动中的情况并获得明显的分离和一个模拟方程式。线性标准范围0.040~1.50gL

(r=0.9979)。在最佳情况下，齐墩果酸迁移的相对标准差为0.46%，从而使齐墩果酸的

含量在4分钟内得到成功的测定[27]。

    张锋等[28]建立了夏枯草中齐墩果酸的含量测定方法。以布洛芬为内标，采用

毛细管区带电泳，高频电导检测；未涂层弹性融硅石英毛细管柱55cm×75μm ID，有

效长度46；1.2mmol/L三乙胺-HLC(pH=10.60),B2环糊精(0.08mmol/L)为运行缓冲液；分

离电压12.5kV；重力进样10s(高度20cm)。结果齐墩果酸线性范围为4.1~114.8L/

(r=0.9995)；平均回收率为96.7%。

（6）旋光法

    肖巧清等[29]建立齐墩果酸片的旋光测定法。取齐墩果酸片40片，精密称定，

研细，精密称取适量(约相当于齐墩果酸0.25g)，置100ml量瓶中，加无水乙醇80ml，

微温溶解，放冷至室温，加无水乙醇至刻度、摇匀、过滤、弃去初滤液。取续滤液照

本法测定旋光度，根据回归方程求出浓度，并求出相当于齐墩果酸标示量的百分含

量。结果：平均回收率99.99%，线性范围1~10mg/ml。

（7）衍生化气相色谱法

    闫花丽等[30]采用衍生化气相色谱法测定夏枯草中齐墩果酸的含量。方法：重

氮甲烷衍生化气相色谱法，10%SE-30(2m×3mm)色谱柱，气化室及检测器温度

300℃，色谱柱温度27℃。结果：线性范围0.0025~0.4mg·ml-1，r=0.9994，齐墩果酸

平均回收率为93.53%。

    OA是植物化学成分,毒性很低,具有多种生物活性——抗病毒、消炎、增强免疫和

抑制免疫(免疫双向调解作用)、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗艾

滋病毒等。OA对恶性肿瘤化疗造成的免疫功能下降的恢复和对抗结核药物的肝损害

的保护意义重大,恶性肿瘤是对人类生命威胁最严重的疾病,而结核病近10年来全球性

漫延迅速,损害人类健康。降血脂、降糖、抗病毒,特别是抗艾滋病病毒活性的发现,都

是非常可喜的苗头。说明OA有非常广阔的开发前景。目前OA生物活性开发利用尚不

多。制剂种类单一,生物利用度不高,是其局限。靠植物性来源,资源有限,应考虑OA的

全合成和衍生物的合成。相信今后深入研究开发会有更丰硕的成果问世。

参考文献

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[20] 石力夫,蔡涛,吴广通,等.不同产地女贞子水溶性成分及齐墩果酸的反相高效液相色谱分析[J].中国中药杂志,1998,23(2):78.

[21] 卢文彪.薄层扫描法测定白花蛇舌草中齐墩果酸含量量[J]. 时针国医国药,2001,12(11):961-962.

[22] 代云桃,郭小青,秦雪梅,等.女贞子中齐墩果酸含量测定方法中层析条件的改进[J].中成药,2008,30(1)：1-2.

[23] 唐声武,裴瑾,郭力.川木通中齐墩果酸的含量测定[J].成都中医药大学学报,2000,23(2):53-54.

[24] 杨辉,赵咏,李军.双波长薄层扫描法测定齐墩果酸片的含量[J].数理医药学杂志,2008,21(2):207-208.

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[28] 张锋,朱培仪,宋粉云. 毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J]. 广 东 药 学 院 学 报,2008,24(2): 108-111.

[29]肖巧清,李玉兰.旋光法测定齐墩果酸片的含量[J].天津药学,2002,14(3):80-81.