衰老的自由基学说最早1956年提出，并逐步发展为自由基一氧化应激学说。此学说认为在生命活动过程中产生的自由基对生物大分子、细胞器、细胞等累积性氧化损伤，导致组织损伤和器官功能衰退，诱导及加速机体衰老。在病理条件下或随着年龄的增加，各种内外因素导致自由基大量、过多产生，超过了机体的抗氧化能力，便产生氧化应激，过多自由基通过损伤细胞核及线粒体DNA、生物膜脂质过氧化、蛋白质交联变性等多种方式引起细胞损伤，氧化损伤逐渐累积，最后导致各种老年性疾病的发生和发展。

本实验室通过大量调研文献，筛选出具有潜在抗氧化作用的中药，只在通过实验最终筛选出具有抗氧化作用比较强的药味，进一步开发利用！

DPPH（二苯基苦味酰基自由基，）在有机溶剂中是一种稳定的以氮为中心的自由基，其单电子在517 nm附近有最大吸收。[DPPH·]甲醇溶液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。当[DPPH·]甲醇溶液中有自由基清除剂存在时，[DPPH·]的单电子被配对而使ESR信号减弱，溶液颜色变浅，直至达到稳定。因此，可以通过在517nm波长处检测不同待测样品对[DPPH·]自由基的清除效果，从而评价样品的抗氧化能力。本实验参照相关文献用紫外分光光度计筛选了九味中药的DPPH自由基清除活性，并测定了半效应浓度（EC50）。

一、试剂与仪器

二苯代苦味酰自由基（DPPH）、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚；氯仿、甲醇均为分析纯；紫外可见分光光度计为上海产S54A型分光光度计。

二、实验方法

2.1样品的制备

待测样品：九味中药分别采用水煎煮的方法提取浓缩成每1g提取液相对于10g原药材。每份提取液以最适溶剂溶解后，配成1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml六个浓度的溶液待测。

2.2 DPPH标准曲线的制备

精密称取DPPH标准品12.62 mg,加入200 ml无水甲醇,配制成浓度为0.16 mmol/L的储液。分别精密移取1.00 mL各个样品的六个浓度的待测溶液，依次迅速加入1.00 mL DPPH甲醇溶液。在选定最大吸收波长(517 nm)的条件下,分别测定其吸光度。

2.3样品的自由基清除能力测定

DPPH溶液（1.00 mL）加入不同浓度的样品的具塞试管中,等体积混合摇匀,于室温下暗处静置30 min后，在517 nm处测定其吸光度,并以相应的溶剂、DPPH溶液与样品溶剂混合液作为空白对照。

其抑制率根据公式计算：

抑制率(%)=[1-(A样品-A样品空白)/A对照-A空白]×100%。

式中：A样品—1mLDPPH溶液+1mL样品溶液的吸光度，

A样品空白—1mL样品溶液+1mL甲醇的吸光度，

A对照—1mLDPPH溶液+1mL甲醇的吸光度，

A 空白—1mL甲醇+1mL样品溶剂的吸光度。平行测定三次，计算平均值，阳性对照为BHT。计算各浓度下的抑制率后，计算IC50，换算为摩尔浓度。

三、实验结果

结果见表，可知中药中1、2、3、4显示了较强的DPPH自由基清除活性，均比阳性BHT对照活性高，尤其是3其活性是BHT的六倍。其他中药未见明显的抗氧化活性。