维权声明:本文为qinjianping原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的,均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
HPLC法同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量
摘要: 目的 建立HPLC法同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量。方法 采用Phenomenex Kinetex C18柱,以乙腈-水梯度洗脱,流速1ml/min,柱温30℃,检测波长250nm。结果 五味子醇甲在0.2156~2.1560μg(r=0.9999),五味子酯甲在0.0650~0.6500μg(r=0.9999),五味子甲素在0.0346~0.3460μg(r=0.9999),五味子乙素在0.0692~0.6920μg(r=0.9999),丹参酮ⅡA在0.0240~0.2400μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均回收率五味子醇甲为97.92%,RSD为2.34%(n=6);五味子酯甲为100.28%,RSD为2.57%(n=6);五味子甲素为98.34%,RSD为2.73%(n=6);五味子乙素为98.06%,RSD为1.61%(n=6);丹参酮ⅡA为99.13%,RSD为1.42%(n=6);结论 本法简便,灵敏度高,重现性好,可用于益心舒片的质量控制。关键词:益心舒片;五味子醇甲;五味子酯甲;五味子甲素;五味子乙素;丹参酮ⅡA;HPLC法Determination of Schizandrin ,Schisantherin, Deoxyschizandrin , γ-Schishandrin and Tanshinone ⅡA in Yixinshu Tablet by HPLCQIN Qian-ping,WU Jian-xiong, BI Yu-an,LIN Xia,WANG Zhen-zhong,XIAO Wei (Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.Ltd, Lianyungang 222001,China )Abstract : Objective To establish a HPLC method for the determination of Schizandrin ,Schisantherin, Deoyschizandrin ,γ-Schishandrin and Tanshinone ⅡA in Yixinshu tablet.
Methods The Phenomenex Kinetex C18 column was used with a mobile phase of acetonitrile-water gradient elution,the flow rate was 1ml/min,the column temperature was 30℃,the detection wavelength was 250nm. Results The linear ranges of Schizandrin ,Schisantherin, Deoxyschizandrin ,γ-Schishandrin and TanshinoneⅡA were 0.2156~2.1560μg(r=0.9999),0.0650~0.6500μg (r=0.9999),0.0346~0.3460μg (r=0.9999) , 0.0692~0.6920μg (r=0.9999) and 0.0240~0.2400μg (r=0.9999) respectively.The average recoveries of five components were 97.92%,100.28%,98.34%,98.06% and 99.13%.Conclusion The method is simple ,sensitive and repeatable.It can be a method for quality control of Yixinshu tablet. Key words:Yixinshu tablet; Schizandrin; Schisantherin; Deoxyschizandrin;γ-Schishandrin; Tanshinone ⅡA ; HPLC益心舒片处方由人参、丹参、五味子等药组成,其中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素为五味子中的主要有效成分,丹参酮ⅡA是丹参的主要有效成分。为了更好的控制产品质量,保证临床疗效,本文参照药典[1]及文献[2] [3],建立了HPLC法测定益心舒片制剂中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量,方法可靠、灵敏、快速。1 仪器和试药Waters 2695高效液相色谱仪;Waters 2487检测器;五味子醇甲(批号:110857-200709),五味子酯甲(批号:111529-200803),五味子甲素(批号:110764-200609),五味子乙素(批号:110765-200508),丹参酮ⅡA(批号:110766-200616),对照品均购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱纯),水(超纯水),其余试剂均为分析纯。益心舒片(江苏康缘药业股份有限公司生产)。2 方法与结果2.1色谱条件色谱柱:Phenomenex Kinetex 2.6µ C18 100A(100*4.6mm);流动相:乙腈(A)-水溶液(B)梯度洗脱,线性洗脱程序为0~35min 30%→70%(A);流速:1ml/min;柱温:30℃;测定波长:250nm;进样量:10μl;理论塔板数以五味子醇甲峰计,不得低于4000。2.2 对照品溶液的制备取五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA分别为44μg、15μg、15μg、8μg和6μg的混合对照品溶液,即得。2.3 供试品溶液的制备 取本品10片,除去薄膜衣,研细,取约1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入甲醇10ml,超声(功率 250W,频率 40kHz) 提取40分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。2.4 线性关系的考察精密称取对照品五味子醇甲21.56mg、五味子酯甲6.50mg、五味子甲素3.46mg、五味子乙素6.92mg和丹参酮ⅡA 2.40mg,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA浓度分别为431.20μg/ml、130.00μg/ml、69.20μg/ml、138.40μg/ml和48.00μg/ml的标准品储备液。分别精密量取上述溶液0.5ml,1.0ml,2.0ml,4.0ml,5.0ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。分别精密吸取10μl,注入液相色谱仪,以峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),绘制标准曲线。结果见表1。表1 线性范围、回归方程和相关系数
Tab1 Results of linear ranges,regression equations and correlation coefficients
成 分 |
线性范围(μg) |
回归方程 |
相关系数r |
五味子醇甲 |
0.2156~2.1560 |
Y=33328X+19388 |
r=0.9999 |
五味子酯甲 |
0.0650~0.6500 |
Y=24524X-10302 |
r=0.9999 |
五味子甲素 |
0.0346~0.3460 |
Y=40977X-11022 |
r=0.9999 |
五味子乙素 |
0.0692~0.6920 |
Y=32190X-23084 |
r=0.9999 |
丹参酮ⅡA |
0.0240~0.2400 |
Y=70100X-44948 |
r=0.9999 |
2.5 精密度试验精密吸取混合对照品溶液 (五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA浓度分别为43.12μg/ml、16.60μg/ml、6.48μg/ml、14.92μg/ml和5.18μg/ml) 10μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,测得峰面积,计算RSD。五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA峰面积的RSD分别为2.41%、2.48%、2.23%、2.34%和2.47%。结果表明精密度良好。2.6 稳定性试验取本品(批号:090501)10片,除去包衣,研细,取约1g,精密称定。按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液,精密吸取供试品溶液10μl,分别于第0、2、4、6、9、12小时注入液相色谱仪,测得峰面积,计算RSD。五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA峰面积的RSD分别为1.10%、1.36%、0.99%、1.54%和1.24%。结果表明,供试品溶液在12小时内稳定。2.7 重复性试验取本品(批号:090501)10片,除去包衣,研细,取约1g,精密称定。按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液,平行制备6份,测定,计算含量,结果五味子醇甲平均含量为0.15mg/片,RSD为1.03%;五味子酯甲平均含量为0.036mg/片,RSD为2.96%;五味子甲素平均含量为0.019mg/片,RSD为2.88%;五味子乙素平均含量为0.043mg/片,RSD为2.96%;丹参酮ⅡA平均含量为0.014mg/片,RSD为2.66%。结果表明本方法重复性良好。2.8 回收率试验取本品(批号:090501,含量:五味子醇甲为0.15mg/片,五味子酯甲为0.036mg/片,五味子甲素为0.019mg/片,五味子乙素为0.043mg/片,丹参酮ⅡA为0.014mg/片。),除去包衣,研细,取6份,每份约0.5g,精密称定,分别精密加入含五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA为2160μg/ml、679.0μg/ml、346.0μg/ml、662.0μg/ml和148.0μg/ml的混合对照品溶液1ml,然后精密加入甲醇9ml,按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液,进行含量测定,并计算回收率。结果见表2。表2 回收率测定结果(n=6)
Tab 2 Results of recovery
成 分 |
平均回收率(%) |
RSD(%) |
|
五味子醇甲 |
97.93% |
2.34% |
|
五味子酯甲 |
100.29% |
2.57% |
|
五味子甲素 |
98.34% |
2.73% |
|
五味子乙素 |
98.05% |
1.61% |
|
丹参酮ⅡA |
99.08% |
1.42% |
|
2.9 样品含量的测定 取3批益心舒片样品,制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定,计算,结果见表3. 表3 样品测定结果(n=3)
Tab 3 Results of content determination of the samples
| 090501 | 090502 | 090503 |
五味子醇甲(mg/片) |
0.15 |
0.16 | 0.16 |
五味子酯甲(mg/片) | 0.036 | 0.042 | 0.037 |
五味子甲素(mg/片) | 0.019 | 0.021 | 0.022 |
五味子乙素(mg/片) | 0.043 | 0.046 | 0.047 |
丹参酮ⅡA(mg/片) | 0.014 | 0.017 | 0.015 |
3 讨论 3.1在供试品溶液的制备时,考虑到指标成分的提取率,以及其他成分对含量测定的影响,考察了提取溶媒乙醇、甲醇、80%甲醇、70%乙醇、50%甲醇和50%乙醇,比较了超声提取和回流提取的效果。结果表明采用甲醇超声处理提取效果较好。3.2本文采用HPLC法进行五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量测定,比较了甲醇-水、乙腈-水和乙腈-0.1%磷酸溶液[4]三种流动相系统的分离效果,结果采用乙腈-水溶液分离效果较好。比较了检测波长[4] [5] ,结果表明250nm处,各峰峰形良好,基线平稳,分离度高。比较了Phenomenex Kinetex C18柱、Phenomenex Luna C18柱和Kromasil C18柱,结果Phenomenex Luna C18柱和Kromasil C18柱未能使本文中所检测的5个成分均达到基线分离,快速分离柱Phenomenex Kinetex C18柱能较好的分离本品中上述5个成分。