主题：【第八届原创】QuEchERS方法应用于动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定

        喹诺酮是一类合成抗生素类药物，治疗系统感染疾病，并且在动物饲养中作为预防和治疗药物普遍使用。近年来，这些药物在动物组织中的残留已被引起广泛关注。联合国粮农组织、世界卫生组织食品添加剂专家联合委员会、欧盟都已制定了多种喹诺酮类药物在动物组织中的最高残留限量。
      喹诺酮类药物各种残留分析方法，主要包括高效液相法(HPLC)以及与此相关的HPLC-UV、HPLC-FD、HPLC-DVD、LC-MS/MS、LC-ESI-MS/MS，另外还有荧光光谱法、毛细管电泳法和酶联免疫法等。样品前处理主要采用SPE、GPC、液液萃取等净化方法；但是目前还没有文献采用QuEchERS方法净化。而且官方所发布标准的检测方法中大多数是LCMS-SPE或者LCMS-LLE。
        本方法基于QuEchERS方法原理，采用乙腈提取，然后取出1 mL净化，上机分析。本方法前处理过程简单、方便，并能同时检测马波沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、洛美沙星、双氟沙星、萘啶酸、氟甲喹；节省时间，降低基质效应。回收率达85%以上，保证实验结果的准确性、重现性；本方案方法检出限均为1.0 ug/kg，优于国标方法《GB/T 21312-2007 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱 质谱法》，可供广大分析工作者使用。
1、适用范围                                                                               
适用于草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜等动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素等药物残留量的测定。本方法检出限0.1ug/kg。
2、提取
(1) 猪肉、草鱼样品
取5.0 g样品与2.0 g氯化钠，搅匀，加5 mL乙腈，涡旋混合1 min，振荡5 min，6000rpm下离心2 min，取 1mL上清液待净化。
(2) 牛奶样品
取5.0 g样品与2.5 mL乙腈，涡旋混合1 min，加2.0 g氯化钠和2.5 mL乙腈，涡旋混合1 min，6000 rpm下离心2 min，取 1mL上清液待净化。
(3) 蜂蜜样品
取5.0 g样品，加5 mL水溶解，涡旋1 min，加2.0 g氯化钠和5 mL乙腈，涡旋混合1 min，6000 rpm下离心2 min，取 1mL上清液待净化。

3、净化
将1 mL 提取液转移到ProElut QuE 2mL Tube(Cat#：64531)，涡旋混合30 S，10000 rpm下离心1 min，取上清液500 μL于浓缩管中，加水100 μL，涡旋混匀，室温下氮吹至剩余约100 μL溶液，加水定容至500 μL，混匀，过0.22 μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。

4、分析条件
4.1 UPLC 条件：
色谱柱：Endeavosil C18，100×2.1 mm，1.8 μm  (Cat#：87003)
流  速：0.2mL/min
进样量：5 μL  柱  温：35 ℃
流动相：A： 10 mmol/L乙酸铵    B：乙腈
梯度设置

时间/Min.	0	4	4.5	6	6.5	12
A（%）	80	50	10	10	80	80
B（%）	20	50	90	90	20	20

4.2 质谱条件：
电离模式：ESI                                扫描方式：  负离子扫描
检测方式：多反应监测                    电喷雾电压：-4500 V
雾化气压力：50 psi                        辅助气压力：50 psi
气帘气压力：20 psi                        离子源温度：500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

5、实验结果                             
草鱼、猪肉、牛奶、蜂蜜样品中氯霉素类药物的LC-MS/MS检测添加回收结果

氯霉素多反应监测色谱图

甲砜霉素多反应监测色谱图

草鱼空白样品总反应监测图

草鱼加标样品总反应监测图

猪肉空白样品总反应监测图

猪肉加标样品总反应监测图

牛奶空白样品总反应监测图

牛奶加标样品总反应监测图

蜂蜜空白样品总反应监测图

牛奶加标样品总反应监测图