主题：【第十一届原创】4-氨基安替比林萃取分光光度法测定水中挥发酚

4-氨基安替比林萃取分光光度法测定水中挥发酚

鹤壁市农检中心    王丽娟

      酚是一种中等强度的化学毒物，，对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用,也可抑制中枢神经系统或损害肝、肾功能。含酚废水若不经过处理，直接排放、灌溉农田则可污染大气、水、土壤和食品，因此挥发酚为水质监测必测项目，工作中常用的是萃取分光光度法测定。
      本方法的原理是：用蒸馏法使挥发使挥发性酚类化合物蒸馏出，并与干扰物质和固定剂分离。由于酚类化合物的挥发速度是随馏出液体积而变化，因此，馏出液体积必须与试样体积相等。
      被蒸馏出的酚类化合物，于PH10.0±0.2的介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料.用三氯甲烷萃取后，在460nm波长测定吸光度，以测定水样中的苯酚含量。
      一、材料与方法
      实验开始前，准备所需要的试剂、仪器、样品等。
    （一）试剂的准备（如无特殊说明为分析纯试剂，实验用水为新制备的蒸馏水）
      水、氢氧化钾、高锰酸钾、三氯甲烷、苯酚、氨水、盐酸、磷酸溶液1+9、硫酸溶液1+4、氢氧化钠、氯化铵、4-氨基安替比林、铁氰化钾、甲基橙等。
在所用试剂中需要注意的是4-氨基安替比林，因为4-氨基安替比林的质量直接影响空白试验的吸光度值和测定结果的精密度。必要时可进行提纯具体步骤为：将100mL配制好的4-氨基安替比林溶液至于烧杯中，加入10g硅镁型吸附剂（弗罗里硅土，60目～100目，600℃烘制4h），用玻璃棒充分搅拌，静置片刻，将溶液在中速定量滤纸上过滤，收集滤液，置于棕色试剂瓶内，与4℃下保持。提纯完成后，应对提纯效果进行验证，使方法的检出限、精密度和准确度符合要求。

4-氨基安替比林的提纯

      （二）仪器和设备
      分光光度计：具有460nm波长，并配有30nm的比色皿；一般实验室常用仪器和设备。
      （三）样品
      按照HJ/T 91的相关规定进行采集和保存的水样。在采集样品现场应用淀粉-碘化钾试纸检测样品，若试纸变蓝，应及时加入过量硫酸亚铁去除。
      二、检验过程
    （一）预蒸馏
      取250mL样品移入500 mL玻璃蒸馏器中，加25mL水，加数粒玻璃珠以防暴沸，再加数滴甲基橙指示液，若试样未显橙红色，则需继续加入磷酸溶液。连接冷凝器，加热蒸馏，收集馏出液250mL至容量瓶中。

加热蒸馏

      （二）显色
      将馏出液250mL移入分液漏斗中，加入2.0mL缓冲溶液，混匀；再加入1.5mL4-氨基安替比林溶液，混匀；再加1.5mL铁氰化钾溶液，充分混匀后，密塞，放置10min.

加入试剂混匀

      （三）萃取
      在显色分液漏斗中准确加入10.0mL三氯甲烷，密塞，剧烈震荡2min，倒置放气，静置分层。然后用棉签拭干分液漏斗颈管内壁，并于颈管内塞一小团干脱脂棉，将三氯甲烷层通过干脱脂棉团，弃去最初滤出的数滴萃取液后，将余下的三氯甲烷直接放入光程为30mm的比色皿中。

加入三氯甲烷、震荡、静止、萃取

      （四）吸光度测定
      于460nm波长，以三氯甲烷为参比，测定三氯甲烷层的吸光度值。
      （五）校准系列的制备
      同时绘制校准曲线：于一组7个分液漏斗中，分别加入100ml水，依次加入0.00、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL酚标准使用液，再分别加水至250ml。通过显色、萃取、比色测定出标准系列的吸光度。由校准系列所测得的吸光度减去零浓度管的吸光度值，绘制吸光度值对酚含量的曲线；根据测得的试样中酚的吸光度（试样的吸光度扣除零空白试验的吸光度）从校准曲线上查得试样中挥发酚的质量（ug），再除以试份的体积（ml），即得到试样中挥发酚的浓度。

校准曲线

三、总结
1、4-氨基安替比林的质量直接影响空白试验的吸光度值和测定结果的精密度最好进行提纯。
2、加入显色剂和铁氰化钾的量要严格一致，因多加入或少加入的带色物的颜色都会直接影响吸光度。
3、对每一个分液漏斗振摇力度和时间应一致，分液漏斗应严密，开始振摇十几次后应放气一次，但应小心液体不要漏出。
4、自制蒸馏装置一次只能蒸馏两个，做一批样品需要较长时间，建议购买全自动蒸馏装置，节省人力节省时间，提高工作效率。