主题：【分享】转！安捷伦液相色谱仪维修小妙招：详细解析仪器常见故障及解决方法

可能原因：
（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；
（2）样品污染沉积；
解决方法：
处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下 降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；
对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

2. 指示可能原因：

（1）泵密封垫圈磨损；
（2）大量气泡进入泵体。
解决方法：
处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
3. 不稳定
可能原因：
系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。
解决方法：
处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
4. 峰分叉可能原因：

（1）色谱柱被污染；
（2）柱头填料塌陷；
解决方法：
处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的 长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。
对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
5. 重复性差可能原因：

（1）进样阀漏液；
（2）加样针不到位；
（3）液量不足；
解决方法：
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈；
对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。
另外日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要：
（1）注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未 用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；
（2）样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；
（3）色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
6. 其它原因及解决方法，故障类型可能原因解决方法

基线噪声大
随机性－ 污染物积聚冲冲洗柱；净化样品；使用HPLC级溶剂
连续性－ 检测器灯故障更换紫外灯（寿命为1000小时）
偶然性－ 外部电气干扰使用LC系统专用稳压器
样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6
双峰
样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6
进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相
滤芯堵塞更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤器
柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱
进样器流路不通畅更换进样器转子
柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载使用更高负载量的固定相 增加色谱柱内径 减少样品量
单峰－ 存在干扰性组分净化样品；预分离
拖尾峰
开始出双峰请参见双峰
存在未扫的死体积减少接头的数量 确保进样器密封垫紧密 确保接头正确固定
碱性化合物－ 硅醇相互作用换成聚合物固定相
碱性物质－ 硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺
硅胶基－ 柱降解使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻
峰展宽
进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质
进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散
数据系统的采样速率过低增大采样
检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配
流动相粘度过高提高柱温
检测器池容积过大使用尽可能小的池容积（系统中无热交换器）
注射器体积过大减少进样量
保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相
压力波动
单向阀泄漏更换单向
泵密封垫泄漏更换泵密封
微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相
压力渐增
微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相
水/有机系统－ 缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物；确保兼容性
保留超出总渗透体积
体积排阻－ 特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂
保留时间不断变
动柱温不断变化使柱恒温；绝缘；保证实验室温度恒定
平衡时间不足以适应梯度洗脱要求，或等度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 个柱容积通过色谱柱
流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气；保持溶剂贮器盖好；制备新的流动相
缓冲能力不足用>20 mM 浓度的缓冲液
在线流动相混合不一致保证梯度系统输送恒定组成；与手动制备流动相核对
污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物
最初几次进样— 吸附在活性部位用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状态
保留时间逐渐缩短
流速在增加检查泵以确保正确；否则需重调
柱上进样超载减少样品
键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间
保留时间逐渐增加
流速在减慢解决液流中的漏液现象，更换泵密封垫，检查泵的涡流和气泡
硅胶填料的活化点使用流动相改性剂
键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间
流动相组成在变化确保流动相容器盖好
硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱
硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料
灵敏度问题
峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内
最初几次进样—样品在样品池或柱中被吸附自动进样器 流路阻塞用浓样品处理样品池/柱
自动进样器流路阻塞检查流量情况，确保无阻塞现象
进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品
在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品，优化样品制备方法
柱平衡时间减慢（离子对现象）
长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂