主题：【第十三届原创】GB 5009.185-2016 食品安全国家标准食品中展青霉素的测定标准解读

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鹤壁农检联合队发表于：2020/06/01 05:55:26 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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6月二等奖

GB 5009.185-2016 食品安全国家标准食品中展青霉素的测定标准解读

包含方法的原理、试剂、仪器、分析步骤、结果表述等主要技术内容。适用于食品（果汁饮料、果酒、果酱、果干及薯类制品等）中展青霉素的测定和确证。

（一）原理

澄清液体样品（果酒样品需除去乙醇）直接固相萃取净化；混浊液体样品和固体样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。

（二）试剂及仪器

液相色谱仪:Agilent 1200-6410 LC/MS，色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；流速：0.2mL/min；流动相：A：纯水 B：甲醇梯度洗脱；

Iron Source: ESI-；Capillary: 4 kV；Fragmentor:135；Delta EMV: 300；Gas Temp: 350℃； Gas Flow: 11 L/hr；Nebulizer: 35 psi。

阴离子交换柱：Thermo HyperSep Retain-AX固相萃取柱,3mL/60mg;

上机工作液（临用现配）：移取5.0 mL，1.0 μg/mL展青霉素标准溶液至10 mL容量瓶中，用pH4.0水定容，混匀，浓度为0.5μg/mL。

（三）分析步骤

取混合均匀的样品4.0 g，加50 μL果胶酶，4 mL水混匀，在40℃下酶解2 h,放置室温后，加入20 mL乙酸乙酯，涡旋提取1 min，于4000 r/min离心5 min，取上清液至鸡心瓶中，40℃旋转蒸干,加pH4.0水3 mL洗脱（清汁样品不需要酶解、提取，直接过柱），过阴离子交换柱（使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化），2 mL 5mmol/L乙酸铵溶液、1 mL水淋洗，抽干；弃去淋洗液；2 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，加1滴冰乙酸，40℃氮气吹干，2 mL pH4.0水定容洗脱，过水系滤膜，上机测试。

说明：

1、展青霉素在碱性条件下不稳定；

2、GB 5009.185-2016果胶酶(液体):活性≥1500U/g。

3、展青霉素在反相C18柱上保留较弱，检测时将色谱柱改为对极性化合物保留更强的HSS T3 1.8μm柱。

4、对饮料清汁样品的前处理，采用直接固相萃取净化法，方法简单、安全、可操作性强、结果可靠。

饮料混汁和果酱这样的试样，需要先将样品中的果胶累物质以果胶酶水解，以便于展青霉素能充分的被提取，经过实验发现，采用室温酶解果胶、乙酸乙酯萃取即可将展青霉素充分提取出，此前处理方法操作简单、安全、结果可靠。

果干这类固体试样的试样，需要通过充分均质粉碎才能保证结果的可靠性，经过实验发现，果干类试样要粉碎粉状，用水充分浸泡后才能保证果胶酶能充分接触细胞壁这类的果胶物质，保证展青霉素完全释放出来，从而保证结果的准确性和重现性。

检测展青霉素时须注意以下几个方面：

1、展青霉素在碱性条件下不稳定；

2、GB 5009.185-2016果胶酶(液体):活性≥1500U/g。

3、展青霉素在反相C18柱上保留较弱，检测时将色谱柱改为对极性化合物保留更强的HSS T3 1.8μm柱。

4、对饮料清汁样品的前处理，采用直接固相萃取净化法，方法简单、安全、可操作性强、结果可靠。

饮料混汁和果酱这样的试样，需要先将样品中的果胶累物质以果胶酶水解，以便于展青霉素能充分的被提取，经过实验发现，采用室温酶解果胶、乙酸乙酯萃取即可将展青霉素充分提取出，此前处理方法操作简单、安全、结果可靠。

果干这类固体试样的试样，需要通过充分均质粉碎才能保证结果的可靠性，经过实验发现，果干类试样要粉碎粉状，用水充分浸泡后才能保证果胶酶能充分接触细胞壁这类的果胶物质，保证展青霉素完全释放出来，从而保证结果的准确性和重现性。

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