我司产品目前对β-内酰胺类抗生素聚合物检测均采用中国药典Sephadex G-10的方法，该法分离机理为：由于 Sephadex G-10 的排阻分子量仅为 700d，因此，除部分寡聚物外，内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰。在特定条件下，内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大，此时在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为。利用此原理，在 Sephadex G-10 凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应; 再改变色谱条件，测定样品中高分子杂质和药物分离后的峰响应; 按外标法计算，即得药品中的高分子杂质相当于药品本身的相对含量。我司在多批样品的测定实践中，遇到了很多问题，比较头疼的是系统适用性经常达不到要求，导致偏差产生，而经根本原因分析为方法本身问题，因此，选用专属性更好，灵敏度更高的方法具有非常大的现实意义。

【凝胶色谱原理】

一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。

【体积排阻色谱（SEC）分离原理】

分子的体积排阻，样品组分和固定相之间原则上不存在相互作用，色谱柱的固定相是具有不同孔径的多孔凝胶，只让临界直径小于凝胶孔开度的分子进入（保留），其孔径大于溶剂分子，所以溶剂分子可以自由地出入。高聚物分子在溶液中呈无规则线团，线团的体积和分子量有一定的线性关系，对不同大小的溶质分子可以渗透到不同大小的凝胶孔内不同的深度，小的溶质分子，大孔小孔都可以进去，甚至可以渗透到很深的孔中。因此小的溶质分子保留时间长，洗脱体积大，而大的溶质分子保留时间短，洗脱体积小。

Sephadex G-10与BioCore SEC-150参数比较

液相色谱仪器条件

色谱柱：BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm

流动相：150 mM 磷酸盐缓冲液（pH6.8）：乙腈=95:5

流速：0.6 mL/min

柱温：25 ℃

进样量：10 μL

检测器：268nm

样品：青霉素V钾，流动相配制，浓度为5mg/ml

峰名称：因无聚合物对照品，根据分子筛分离原理，主峰前色谱峰均认定为不同聚合度的聚合物。

图谱：

心得体验

此次首次采用纳谱分析开发的SEC色谱柱，流动相在色谱柱说明书推荐流动相基础上，加入5%乙腈，即得到较好的分离效果，理论板数由G-10柱的几百提高到现在的两万多，主峰与相邻峰分离度达到1.7，达到基线分离，各聚合物峰峰形较好，且彼此分开，与传统G-10相比，具有无可比拟的优越专属性。纳谱分析品牌值得信赖，以后会继续支持！

本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品，原作者信息：

单位：西南药业股份有限公司

姓名：李*

色谱柱信息：纳谱分析BioCore SEC-150,5um 7.8*300mm