QuEChERS前处理方法联合液相色谱-质谱联用法测定水果中7种农药残留的测定

摘要：采用QuEChERS前处理方法联合液相色谱-质谱联用法测定水果中7种农药残留。首先用QuEChERS方法进行样品前处理，即乙腈提取,提取溶液经脱水后离心,用分散性吸附剂去除离心提取液中的干扰基质(如脂肪酸和色素等),然后直接进行液质质分析。添加回收4种样品(苹果、桃、葡萄、梨)的回收率均在70％～130％之间,相对标准偏差(RSD)均小于20％。

关键词：农药残留 QuEChERS前处理方法液相色谱-质谱联用法

克百威、三羟基克百威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、涕灭威、灭多威、辛硫磷是水果中普遍使用的杀虫剂、杀菌剂。液相色谱-质谱联用法测定农药残留量国标方法麻烦繁琐，本文采用QuEChERS前处理方法，快速、简单、价廉、高效、耐用，致力于降低成本，提高效率。

1 试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682规定的一级水。

1.1 试剂

1.1.1乙腈（CH3CN,CAS号：75-05-8）：色谱纯

1.1.2 乙酸乙酯（CH3COOC2H5,CAS号：141-78-6）：色谱纯

1.1.3 醋酸钠（CH3COONa,CAS号：6131-90-4）

1.1.4 硫酸镁（MgSO4,CAS号：7487-88-9）

1.1.5 甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1或170082-17-4）：色谱纯

1.1.6 乙酸铵（CH3COONH4，CAS号: 631-61-8）

1.1.7 甲酸（CH2O2，CAS号:64-18-6）：色谱纯

1.2 溶液配制

1.2.1乙腈-醋酸溶液（99+1）：量取10 mL醋酸加入990mL乙腈中，混匀。

1.2.2乙酸铵溶液：1mol/L

1.2.3 流动相：流动相A 乙酸-铵水溶液（2mmol/L,含0.1%甲酸）：1000 mL一级水，加入2 ml乙酸铵溶液（1mol/L），1 mL甲酸

流动相B 甲醇

1.3 标准品

克百威、三羟基克百威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、涕灭威、灭多威、辛硫磷标准品

1.4 标准溶液配制

1.4.1标准储备溶液(100 mg/L)

1.4.2混合标准溶液：吸取一定量的农药标准储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇容至刻度，10.0 mg/L。混合标准溶液避光0℃～4℃保存，有效期3个月。

1.4.3基质混合标准工作溶液：空白基质溶液氮气吹干，加入1 mL相应质量浓度的混合标准溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）。基质混合标准工作溶液应现用现配。

注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。

1.5 材料

1.5.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40～60μm。

1.5.2陶瓷均质子：2cm（长）×1cm（外径）

1.5.3微孔滤膜(有机相)：13 mm×0.22 μm。

2 仪器

2.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有ESI源，型号岛津LCMS-8040

2.2分析天平：感量0.1 mg和0.01 g。

2.3高速匀浆机：转速不低于15 000 r/min。

2.4离心机：转速不低于10000r/min。

2.5组织捣碎机。

2.6旋转蒸发仪。

2.7 氮吹仪：可控温。

2.8涡旋混合器。

3 试样制备

3.1 试样制备

水果随机取样1 kg,样品取样部位按照GB 2763规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放入聚乙烯瓶中。

3.2 试样贮存

将试样按照测试和备用分别存放。于-18 ℃条件下保存。

4 分析步骤

4.1 QuEChERS前处理

称取10 g试样（精确至0.01 g）于50 mL塑料离心管中，加入15 mL1%醋酸乙腈溶液，用涡旋混合器涡旋1min。加入6g硫酸镁、1.5g NaAc及1颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min后8000 r/min离心5 min。吸取10 mL上清液加到内含1.5g硫酸镁及500mg PSA的15 mL塑料离心管中涡旋混匀1 min。4000 r/min离心5 min，准确吸取3 mL上清液于10 mL试管中，40℃水浴中氮气吹至近干。加入2 mL甲醇复溶，过微孔滤膜（4.5.6），用于测定。

4.2测定

4.2.1仪器参考条件

a) 色谱柱：Shim-pack GISS 2.1m×100mm,1.9μm

b) 色谱柱温度：40℃

c)流动相梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

Time/min	0.50	1.00	4.00	4.10	7.00	7.20	8.50
流速/mL/min	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3
B Conc /%	10	50	50	90	90	10	stop

4.2.2 标准工作曲线

精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用甲醇稀释工作液梯度为0.005、0.02、0.05、0.2、0.4 mg/L标准工作溶液。空白基质溶液氮气吹干，分别加入1 mL上述标准工作溶液复溶，过微孔滤膜（4.5.6）配制成系列基质混合标准工作溶液，供液相色谱-质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积纵坐标，农药标准溶液质量浓度横坐标，绘制标准曲线。线性方程和相关系数见图1。

图1 7种农残曲线线性方程和相关系数

4.3试样溶液的测定

将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，保留时间和特征离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。在选定的条件下对农药混合标样进行分析，采集数据，其特征离子见表2。

表2 7种农残保留时间及特征离子

	克百威	三羟基克百威	涕灭威砜	涕灭威亚砜	涕灭威	灭多威	辛硫磷
Tr/min	4.087	2.915	2.482	2.423	3.396	2.620	5.829
定量离子（m/z）	222.00>165.00	222.00>165.00	240.10>86.00	207.10>89.00	208.10>116.10	163.05>88.00	299.00>77.10
定性离子	222.00>123	222.00>123	240.10>223	207.10>132	208.10>89.1	163.05>106	299.00>129

4.4平行试验

按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。

4.5空白试验

除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。具体数据见表3。

表3 不同样品基质中8中农残的空白浓度值

	克百威	三羟基克百威	涕灭威砜	涕灭威亚砜	涕灭威	灭多威	辛硫磷
桃	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.
梨	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.
葡萄	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.
苹果	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.	N.D.

5 结果计算

试样中各农药残留量以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，外标法按公式计算。

式中：

ω———试样中被测物残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

ρ———基质标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

A——试样溶液中被测物的色谱峰面积；

As——基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；

V——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。

计算结果应扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示

6添加回收率实验

本实验分别用苹果、葡萄、梨、桃作为供试样品，采用外标法定量。分别向样品中添加量为0.08 、0.05 mg/kg的7种农残储备液，平行测定2次，按照上述提取，净化、和检测方法，比较添加回收率结果，具体见表4和表5，苹果中7种农残添加回收谱图见图3。由数据分析可知，QuEChERS前处理方法能够很好提取目标物质，并保证添加回收率在70-130 %之间。

表4 不同样品基质中7种农残的添加浓度值（μg/L）

基质/目标物	克百威	三羟基克百威	涕灭威砜	涕灭威亚砜	涕灭威	灭多威	辛硫磷
桃	76.299	51.896	65.838	68.015	57.745	43.007	39.069
梨	76.570	67.940	77.809	74.489	72.503	65.943	46.892
葡萄	78.063	67.233	71.043	67.507	72.451	63.767	42.136
苹果	77.009	70.949	65.010	64.581	74.540	56.289	36.681
理论值	80	80	80	80	80	50	50

表5不同样品基质中7种农残的添加回收率（%）

基质/目标物	克百威	三羟基克百威	涕灭威砜	涕灭威亚砜	涕灭威	灭多威	辛硫磷
桃	95.4	77.3	82.3	85.0	72.2	86.0	78.1
梨	95.7	84.9	97.3	93.1	90.6	126	93.8
葡萄	97.6	84.0	88.8	84.4	90.6	128	84.2
苹果	96.3	88.7	81.3	80.7	93.2	113	73.3