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液相色谱（LC）
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主题：【求助】按EP参考浓度进样出现过载

浏览0 回复8 电梯直达
Eric494
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发表于：2021/07/05 16:31:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近测一个API含量，查了EP的方法，对照品进样浓度为100ug/mL，但是我按这个浓度进样出现了过载。我除了色谱柱不一样其他条件基本和EP相同(至于EP用的什么仪器我也不知道)
EP色谱柱:C18，柱长100mm，内径4.6mm，粒径3.5um;
我的色谱柱:C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径3.5um。
色谱图如下:
图一为100ug/mL浓度 出现过载。
图二为稀释后峰形恢复。
因此想请教一下，是什么原因导致了和药典的差异，应该怎么解决？万分感谢！
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xiaogumd11
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2021/7/5 18:32:13 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
过载出现可能 是仪器量程的不同，或是浓度过大，很多标准与实际会有差异，以实际为准，做一下方法验证（确认）报告，以后面对专家民好解释。
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lijing320323
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2021/7/5 21:09:10 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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有水有渝
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2021/7/6 9:01:57 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
过载的图看不清，流动相是什么，样品是用流动相稀释的吗，如果样品没有相邻峰，柱子延长了，流速可以适当提高一点试试
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Eric494
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2021/7/6 9:07:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
过载的图看不清，流动相是什么，样品是用流动相稀释的吗，如果样品没有相邻峰，柱子延长了，流速可以适当提高一点试试


不太清楚为啥这个图传上来就不清楚了，，，就是一个向前倾斜的峰，类似于直角三角形。

样品的话是流动相稀释的，流速按EP的参考已经是2.0了，可能不太好再提了??。。
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有水有渝
xky0230699
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2021/7/6 13:38:14 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Eric494(Insm_1c26f11b) 发表:

不太清楚为啥这个图传上来就不清楚了，，，就是一个向前倾斜的峰，类似于直角三角形。

样品的话是流动相稀释的，流速按EP的参考已经是2.0了，可能不太好再提了??。。
那只能归结为色谱柱的柱容量比较小了，同一类型的色谱柱，不同厂家、不同规格填料的性能不一样
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安平
byron1111
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2021/7/6 15:08:26 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
        图片最好设法再处理和上传一下为好。


          原始样品的峰高有多大？ 只是存在前伸现象么？

          峰形前伸未必一定存在超载。超载的色谱峰一定峰高较强。

          建议更换一下其他型号的色谱柱实验。
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Eric494
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2021/7/6 18:46:35 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表: 那只能归结为色谱柱的柱容量比较小了，同一类型的色谱柱，不同厂家、不同规格填料的性能不一样
嗯嗯，试了几个品牌的相同参数色谱柱，也都出现了这种峰展宽、向前倾斜的过载样情况。其实感觉样品浓度并不很大，也就100ug/mL，但EP写这样做了，感觉会不会是我检测器参数上有问题呢？
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Eric494
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2021/7/6 18:57:41 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:                  图片最好设法再处理和上传一下为好。                    原始样品的峰高有多大？ 只是存在前伸现象么？                    峰形前伸未必一定存在超载。超载的色谱峰一定峰高较强。                    建议更换一下其他型号的色谱柱实验。
我单独传了下这个过载的图，浓度100ug/mL，峰不高，但还是出现了接近直角形状，稀释后峰型才恢复正常。
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