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液相色谱（LC）

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主题：【求助】如何解决出现负峰的问题？

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Ins_4818853f

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发表于：2024/04/08 17:29:38 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小白第一次使用液相。
目前使用的液相方法出现产物峰前出现一个负峰和另一个峰，产物峰后出现负峰的问题我该如何改进我的液相方法，最大程度避免此种情况干扰？
液相方法：乙腈/0.1%TFA水溶液（pH 2.12）；流速0.9 mL/min；柱温40℃；检测波长：280nM（底物峰；黑色；16min）/210nM(产物峰；粉色；3.7min)
进样为含100 mM 磷酸钾盐缓冲液的酶催化反应，pH 8.0左右。待分离物质底物HMF，产物呋喃二甲胺DAF。

目前方法为文献中得来，是不是我应该改变流动相的组成，将0.1%TFA水溶液变成磷酸盐之类的以降低流动相的吸收避免负峰，或者提高低检测波长210nM的波长。
图二为文献中不同波长下HMF、DAF的吸光度。
希望大家能够提供几点建议，不胜感激！

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hnteng

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2024/4/9 12:41:53 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你把最关键的信息没写出来。流动相乙腈：缓冲液的比例是多少？这个明显是你要检测的物质极性较大，很快跟出来了，跟溶剂峰一起了。你得大大降低乙腈的比例。
另外，能不用缓冲盐就不要用，对柱子、泵都有损伤。建议加点0.1-0.2%醋酸就行了。不要用磷酸缓冲液。

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xiaolanzi5

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2024/4/9 20:15:42 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

呋喃二甲胺在0.1%TFA流动相下出峰更早。这个流动相不合适。

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sdzb1982

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2024/4/10 9:14:12 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

可能溶剂效应，建议你用流动相溶解稀释样品试试。

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Ins_4818853f

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2024/4/10 12:00:04 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 hnteng(hnteng) 发表:
你把最关键的信息没写出来。流动相乙腈：缓冲液的比例是多少？这个明显是你要检测的物质极性较大，很快跟出来了，跟溶剂峰一起了。你得大大降低乙腈的比例。
另外，能不用缓冲盐就不要用，对柱子、泵都有损伤。建议加点0.1-0.2%醋酸就行了。不要用磷酸缓冲液。

不好意思，乙腈：0.1% TFA为2%：98%，感觉应该不太能降低乙腈比例了？

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