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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】液相色谱出峰杂乱是否代表方法不合适？

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Ins_713995a9

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发表于：2024/05/16 17:00:58 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

刚接触液相，最近做了几个检测，结果很奇怪，麻烦帮忙看看，希望能不吝赐教，谢谢！
问题一：我做了糠醛以及羟甲基糠醛的标品，溶于乙醇水溶液（12%乙醇，pH3.0盐酸调节），当日检测，结果液相图整劈叉成了两个峰，之前做过一次是一个峰，那我这个肯是因为什么原因呢，这个可以说是同一种物质吗？

图一，羟甲基糠醛液相图

图二，糠

醛液相图
问题二：糖经过加热检测糠醛生成量，但是这个线很乱，基线是跑平了的，因为这是在标品后面测定的，图一图二标品的基线是跑平的，这种是我流动相的问题吗还是体系太乱了需要纯化，如果我换方法能不能让这个线跑平，另外这个图上面没有我的10min的峰看着，是否能说明没有糠醛还是被掩盖了？

推荐答案：dadgoh回复于2024/05/17

低流速冲柱子试试，分叉有可能是柱子填料未饱和有干的部分所致。

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等一个晴天

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2024/5/16 19:21:03 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

样品浓度过高了，感觉像过载

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Ins_713995a9

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2024/5/16 19:49:32 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 等一个晴天(m3170710) 发表:
样品浓度过高了，感觉像过载

最后一个图吗？我是15%质量分数的糖，进样量10微升，流速1ml/min，这个量也会导致过载吗？

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sdlzkw007

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2024/5/16 19:51:06 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 Ins_713995a9(Ins_713995a9) 发表: 最后一个图吗？我是15%质量分数的糖，进样量10微升，流速1ml/min，这个量也会导致过载吗？

液相色谱柱的承载量，按照质量来算，都是纳克级的

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dadgoh

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2024/5/17 7:08:13 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

低流速冲柱子试试，分叉有可能是柱子填料未饱和有干的部分所致。

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通标小菜鸟

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2024/5/17 9:25:06 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、问题一：峰分叉的原因很有可能跟你进样浓度有关，你的谱图峰面积都3500以上了，那峰面积至少几万甚至几十万，这个浓度太高了，很容易出现分叉峰，建议控制浓度，或者减小进样量，改为2ul。另外你的色谱柱如果使用时间久了，柱效降低，也会造成分叉，但是我认为第一种可能性更大，你可以按照我说的方法试试，将进样量改为2ul，或者对样品进行稀释10倍。
2、问题二：其实你的出峰杂峰很少，不多，不像是基质带来的。而且你的纵坐标比例比较小，类似于方放大了，这种波动更像是流动相带来的，比如你设置了梯度洗脱，如果流动相组成比例发生改变，是会造成基线升高或者降低的，楼主可以尝试优化洗脱梯度，如果能分开，出峰好，改成等度也未尝不可。另外对于10min那没有出峰，那基本上就是没有，不过要看你样品是怎么前处理的，如果样品量小，也可能浓度太低测不到。

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Ins_4a4e62b6

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2024/5/18 8:08:22 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

就是不太合适

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dadgoh

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2024/5/18 8:36:02 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

直接分析反应液，有可能带来一些高吸收成分。建议反应液做一些前处理，以排除不必要的干扰。

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Ins_2e1e84f3

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2024/5/20 11:12:37 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问题1，前两个图，明显就是两个标品进样浓度太大，过载，峰平头且分叉。保持进样量10ul，建议稀释10倍再进样。
问题2，最后一个图。进样后，基线明显低于不走样时。建议优化梯度洗脱方法。在关键物质出峰处，保证基线平缓。
另外，为什么要用盐酸调pH？盐酸对液相管路有腐蚀，不太建议用。是否可以用磷酸，醋酸等？

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