原文由 论坛管理员(4077) 发表:
我的一位朋友(研究生班同学)在上海有机所进行过相关的合成研究(结构改造,半合成,目前他在美国),一般HPLC方法如下:<br>
标本预处理方法,用微量进样器精确吸取25μL经融冻胆汁,与2mL磷酸缓冲液(0.5mol·L-1,pH 7.0)混合,混合液以注射法通过SEP-PAK C18小柱(活化方法:先用2mL甲醇注射预浸湿小柱,然后再用5mL超纯水冲柱),以去除蛋白质、脂类等大部分干扰物质,然后分别用10mL纯水、3mL 10%丙酮、纯水10mL依次洗柱,再用甲醇1.5mL洗脱胆汁酸,置于清洁1.5mL Ep管中,放置于60℃~65℃水浴内加热30min,离心30min(1000r·min-1)后,将液体部分置入新的清洁1.5mL Ep管,分批真空抽干. 再用1mL流动相溶解,经0.22μm滤膜过滤. 收集滤液后,取20μL进样[1-7]. 流动相0.8mL·min-1,柱压2000磅/mm2,柱温30℃,灵敏度0.05AΜFS,检测波长214nm,进样量20μL,分析周期30min. 积分参数:噪音门栏5μv;切割比例1000;最小峰面积为20(μv/sec);最小峰高20μv;最小峰宽缺省值. 精确称取8种结合胆汁酸标准品10mg,分别置于8个10mL清洁容量瓶中,加入流动相10mL,配制成1g·L-1的标准液,放置于4℃冰箱中贮存备用. 分别取8种结合胆汁酸标准液,各自进样20μL,确认每种胆汁酸保留时间. 然后每种胆汁酸标准品各取20μL混合后,依次稀释成125g·L-1, 62.6g·L-1, 31.25g·L-1,25g·L-1, 12.5g.L-1,各进样20μL,标准曲线的绘制以浓度对样品的峰面积比值,进行自动回归分析.
楼上你好,我想知道你的联系方式,因为你的流动相没有给出!