主题:【求助】在agilent 1200 上使用窄径快速分析柱时遇到的问题

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zoujian1978
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大家好,最近使用agilent液相,有一个问题想请教一下,我现在所在实验室有两台agilent 1200 HPLC。配置为 自动进样器,binary pump, 柱温箱,DAD检测器。现在还没有配置在线脱气机。每台液相都配置了两根agilent COLUMN. 一根为agilent epilase 4.6 *150 mm, 5um 的RP-18 HPLC column, 另一根则为zorbax SB 2.1* 50 mm, 1.8 um 的RP-18窄径快速分析柱。两台液相均为新仪器,使用时间不超过100小时,HPLC 柱也是新的HPLC column.

现在的问题如下:当使用4.6 * 150 mm 的HPLC column 时,一切正常 (流动相B为乙腈,A为水。比例为A/B = 20/80,均经过超声预处理10分钟,流动相流速为1.0 ml/min)。但是使用窄径柱时 (流速0.2-0.3 ml /min),基线上会出现很大的锯齿状噪音,噪音形状类似正弦波,在254 nm 下高达80-100 au, 使得正常的分析无法进行,出现的频度为一分钟1-2次。使用过程中柱压一直保持稳定与正常。

开始怀疑氘灯出现故障,但是换下hplc column, 仅以二通管连接,以1.5 ml/min的流速冲洗2 min 后,锯齿状噪音很快消失。因此可初步排除DAD检测器的问题。

当换上4.6 *150 mm的HPLC柱后,以低流速 (0.2-0.5 ml/min)冲洗时,锯齿噪音又开始出现,但提高流速置至1.5 ml/min时,噪音又很快消失。当流速降低至正常的1ml/min 甚至更低时,噪音不再出现。由于没有在线

脱气机,怀疑是流动相混合时产生的气泡,所以将流动相B调整为90 % 乙腈,流动相A,B均预先超声脱气。结果使用窄径柱时,问题依旧发生。此时我怀疑噪音是因为有气泡滞留在DAD检测器中,由于流速较低无法冲出,

大家认为有可能吗? 有使用过agilent zorbax 窄径柱的朋友遇到过类似的问题吗?如果是,有什么办法解决吗?或者有什么其它的原因?希望有高手给予指点。谢谢!

推荐答案:tanggangfeng回复于2007/11/21

建议用100%乙腈,冲洗窄径柱,20ml左右,如果还有,做个空白,看看三维是否有杂质。
补充答案:

dickwang2008回复于2007/11/24

为什么要在检测器后连上一根Peek管呢?难道是为了增加压力?那样灯管能承受那么大得压力嘛?请说明

xiaomity回复于2007/11/24

其实要从根源上解决问题,还是装脱气机。增加柱后压对监测器没好处,它不是赖高压的

sscwxb回复于2007/11/25

检测器出口是必须有背压管的,这样流通池才不会有气泡。流通池的耐压至少也在1-2个兆帕以上。

smileangel1980回复于2007/11/28

这个问题我以前也遇到过,规律的波动,成锯齿形,整体看起来就像梳子,后来在检测池后增加背压就解决了
原因应该就是在柱后突然的压降引起检测池产生气泡

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dickwang2008
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我怀疑气泡是在检测器里面,建议楼主换为两通后,用低流速冲洗看看!Good Luck
zoujian1978
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原文由 dickwang2008 发表:
我怀疑气泡是在检测器里面,建议楼主换为两通后,用低流速冲洗看看!Good Luck


谢谢!我也试过接上二通,冲一会儿后的确就平了,不过换上窄径柱后一会儿又出现这种噪音,不知道您还有什么解决办法吗?
tanggangfeng
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原文由 zoujian1978 发表:
大家好,最近使用agilent液相,有一个问题想请教一下,我现在所在实验室有两台agilent 1200 HPLC。配置为 自动进样器,binary pump, 柱温箱,DAD检测器。现在还没有配置在线脱气机。每台液相都配置了两根agilent COLUMN. 一根为agilent epilase 4.6 *150 mm, 5um 的RP-18 HPLC column, 另一根则为zorbax SB 2.1* 50 mm, 1.8 um 的RP-18窄径快速分析柱。两台液相均为新仪器,使用时间不超过100小时,HPLC 柱也是新的HPLC column.

现在的问题如下:当使用4.6 * 150 mm 的HPLC column 时,一切正常 (流动相B为乙腈,A为水。比例为A/B = 20/80,均经过超声预处理10分钟,流动相流速为1.0 ml/min)。但是使用窄径柱时 (流速0.2-0.3 ml /min),基线上会出现很大的锯齿状噪音,噪音形状类似正弦波,在254 nm 下高达80-100 au, 使得正常的分析无法进行,出现的频度为一分钟1-2次。使用过程中柱压一直保持稳定与正常。

开始怀疑氘灯出现故障,但是换下hplc column, 仅以二通管连接,以1.5 ml/min的流速冲洗2 min 后,锯齿状噪音很快消失。因此可初步排除DAD检测器的问题。

当换上4.6 *150 mm的HPLC柱后,以低流速 (0.2-0.5 ml/min)冲洗时,锯齿噪音又开始出现,但提高流速置至1.5 ml/min时,噪音又很快消失。当流速降低至正常的1ml/min 甚至更低时,噪音不再出现。由于没有在线

脱气机,怀疑是流动相混合时产生的气泡,所以将流动相B调整为90 % 乙腈,流动相A,B均预先超声脱气。结果使用窄径柱时,问题依旧发生。此时我怀疑噪音是因为有气泡滞留在DAD检测器中,由于流速较低无法冲出,

大家认为有可能吗? 有使用过agilent zorbax 窄径柱的朋友遇到过类似的问题吗?如果是,有什么办法解决吗?或者有什么其它的原因?希望有高手给予指点。谢谢!


建议用100%乙腈,冲洗窄径柱,20ml左右,如果还有,做个空白,看看三维是否有杂质。
zoujian1978
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zoujian1978
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大家好,经过努力,现在我们已经解决了这个问题。原因是使用1.8 um的窄径柱时,柱前后的压力差较大 (120-200 bar),使得流动相在经过hplc柱后,以前溶解在柱中的气泡重新释放出来,进入检测器后产生尖峰。在dad检测器后连上一根0.12 mm 直径,0.5 m的peek管后,尖峰很快消失。谢谢大家的帮助,今后有问题多讨论!
dickwang2008
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为什么要在检测器后连上一根Peek管呢?难道是为了增加压力?那样灯管能承受那么大得压力嘛?请说明
xiaomity
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其实要从根源上解决问题,还是装脱气机。增加柱后压对监测器没好处,它不是赖高压的
sscwxb
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检测器出口是必须有背压管的,这样流通池才不会有气泡。流通池的耐压至少也在1-2个兆帕以上。
zoujian1978
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原文由 xiaomity 发表:
其实要从根源上解决问题,还是装脱气机。增加柱后压对监测器没好处,它不是赖高压的


我觉得很有道理,对于不过再现脱气机还有两个月才能到货,时间实在来不及。等再现脱气机到货后,再试试是否有效。连上peek管后,总的柱压上升了5-6个bar.但是现在DAD工作还正常。不知道时间长了会如何。
zoujian1978
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原文由 dickwang2008 发表:
为什么要在检测器后连上一根Peek管呢?难道是为了增加压力?那样灯管能承受那么大得压力嘛?请说明


我看一些帖子上说接PEEK管是为了减少柱前柱后的压力差,也有人在柱后接上一根废弃的预柱,效果也是一样的。
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