紫外可见分光光度计(UV)

主题:【求助】紫外测量时吸收波长的选择问题

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zoujian1978
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大家好,最近做实验遇到一个问题,想请教一下:
我所测量的化合物A最大吸收位于264 nm。该化合物在215 nm处也有较强吸收,但是并非特征吸收。样品溶液中除A外,还有一种基质,在215 nm也有吸收。在测量过程中使用的空白溶液为精确测量的相同浓度的基质溶液。

我准备同时测量264 nm及215 nm处的紫外吸收,通过标准曲线分别测得A的含量,并比较含量的高低。结果发现化合物A的回收率在264nm处接近100 %,而在215 nm处不太稳定,为88-93%。我知道一般做紫外吸收时都会选择最大吸收峰,但是为什么在215nm处的回收率会不正常呢?应该说基质的吸收已经全部被扣除掉了。各位能否解答一下,不胜感谢!
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原文由 zoujian1978 发表:
大家好,最近做实验遇到一个问题,想请教一下:
我所测量的化合物A最大吸收位于264 nm。该化合物在215 nm处也有较强吸收,但是并非特征吸收。样品溶液中除A外,还有一种基质,在215 nm也有吸收。在测量过程中使用的空白溶液为精确测量的相同浓度的基质溶液。

我准备同时测量264 nm及215 nm处的紫外吸收,通过标准曲线分别测得A的含量,并比较含量的高低。结果发现化合物A的回收率在264nm处接近100 %,而在215 nm处不太稳定,为88-93%。我知道一般做紫外吸收时都会选择最大吸收峰,但是为什么在215nm处的回收率会不正常呢?应该说基质的吸收已经全部被扣除掉了。各位能否解答一下,不胜感谢!

回答如下:
1 :215为紫外的末端吸收,很多物质在此峰位都有吸收,也就是说干扰比较大,楼住可以随便找几种物质,做个全波长扫描,会发现215很多物质吸收很强烈.这也是测定过程中很大的一个干扰.
2:看楼住是用标准曲线法做的,你做标准曲线的时候,你选择的是264吧,如果是这样,您用264的标准曲线来说215的回收率,您觉得对吗?建议您在做的时候样品一定要和标准统一,也就是说如果你标准曲线用的215,那你样品也要在215做,不能交叉.这是新手经常出的一个问题.如果不是,则主要是第一个问题.
3基质的影响,请问您用的什么基质,再接着帮你分析
tm123
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因为在最大吸收峰测的灵敏度最好
在次峰也能测  但由于吸收不如最大吸收峰处强 灵敏度就低
zoujian1978
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原文由 zhouyuhu 发表:
原文由 zoujian1978 发表:
大家好,最近做实验遇到一个问题,想请教一下:
我所测量的化合物A最大吸收位于264 nm。该化合物在215 nm处也有较强吸收,但是并非特征吸收。样品溶液中除A外,还有一种基质,在215 nm也有吸收。在测量过程中使用的空白溶液为精确测量的相同浓度的基质溶液。

我准备同时测量264 nm及215 nm处的紫外吸收,通过标准曲线分别测得A的含量,并比较含量的高低。结果发现化合物A的回收率在264nm处接近100 %,而在215 nm处不太稳定,为88-93%。我知道一般做紫外吸收时都会选择最大吸收峰,但是为什么在215nm处的回收率会不正常呢?应该说基质的吸收已经全部被扣除掉了。各位能否解答一下,不胜感谢!

回答如下:
1 :215为紫外的末端吸收,很多物质在此峰位都有吸收,也就是说干扰比较大,楼住可以随便找几种物质,做个全波长扫描,会发现215很多物质吸收很强烈.这也是测定过程中很大的一个干扰.
2:看楼住是用标准曲线法做的,你做标准曲线的时候,你选择的是264吧,如果是这样,您用264的标准曲线来说215的回收率,您觉得对吗?建议您在做的时候样品一定要和标准统一,也就是说如果你标准曲线用的215,那你样品也要在215做,不能交叉.这是新手经常出的一个问题.如果不是,则主要是第一个问题.
3基质的影响,请问您用的什么基质,再接着帮你分析


谢谢九点虎的回复。

实际上我做的时候对该化合物在215与264nm处的吸收分别做了标准曲线,R2均大于0.999。但是在做回收率时,215nm处的回收率还是小于95%.

在做回收率时我是这样做的:配好一定浓度的基质溶液,取一部分基质溶液为空白溶液,取另一部分直接加入已知量的化合物A,以215nm,264nm标准曲线测量化合物A的浓度。我觉得在这种情况下基质的吸收应该能够完全扣除。但是结果还是不理想。

基质的主要成分为环糊精,在紫外200-400处吸收较低,大概是化合物A的十分之一。

今天读了一下李昌厚教授的‘略论紫外可见分光光度计光度准确度的测试’。其中在‘波长重复性’部分提到如选用最大吸收波长作为定量波长,则重新测量时微小的波长差对结果影响不大,如采用最大吸收两侧(也就是斜率较高处)作为定量检测波长,则微量的波长差会使A变化较大。不知道这样解释是否合理?希望和您多讨论一下。
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