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主题：【资料】请教关于梯度洗脱基线问题

浏览0 回复17 电梯直达
wychtao
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发表于：2008/08/21 19:10:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
最近做梯度洗脱时，遇到比较头痛的问题，单进溶剂时基线漂移就比较厉害，甚至有很高的峰出来，如图，17min后没积分的即为基线中也有的峰。当时以为既然溶剂都有，就是空白了，在进样品时就没有积分。
但心里还是没底，请教各位高手，这种现象正常不？梯度洗脱基线漂移是正常，但在后面有峰出来还正常吗？会不会是系统里面残留的东西，或是样品没完全洗脱出来？还有能不能改善一下洗脱程序，使基线好看一些啊？问题比较多，见笑了。
洗脱程序如下：C18柱，A相甲醇，B相甲醇：水=5：95缓冲盐溶液
时间(min)    0    2    12    22    24    32
B%(V/V)    100    100    15    15    100    100
推荐答案：xy200609回复于2008/08/21
这种情况很正常，梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。
补充答案：

欢迎光临iblog回复于2008/08/22

四楼说的没错，而且梯度洗脱中甲醇比乙腈基线漂移更明显，特别是检测波长比较低的时候。梯度洗脱中如果用到缓冲盐，需要注意：随着流动相中有机相比例的增加，要保证缓冲盐不能有析出。

cjf123回复于2008/08/23

建议把甲醇换成乙腈,甲醇的截止波长约为230nm左右,你用的波长为210nm,这样肯定基线波动很大了;另外建议初使条件下平衡的时间长点,特别是在有缓冲盐的情况下.
楼主所说的进空白有峰,如果对结果没什么影响的话(对你所需要的峰无多大干扰),不管它就是了;
检测器如果有气泡的话,会产生较尖锐的峰.

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2008/8/21 19:35:03 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看不见图谱呀，走梯度基线不没有单一流动相看起来那么好是正常的，不过也不会波动很大，只有在梯度后部回到初始流动相比例时才会有一个向下的负峰，不确定时，建议每次做时都进行空白校正．
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阿du
duliuhui
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2008/8/21 19:38:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有时候会出现这种情况的，后面强溶剂会洗脱出一些杂峰。个人觉得如果不影响你主要组分的定性定量可以不予考虑。
不过试验结束后最好再用强溶剂冲下柱子，以防残留。
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雾非雾
mcds
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2008/8/21 20:13:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有个感觉,液相比气相要麻烦很多的.不知是不是这样?
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xy200609
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2008/8/21 21:27:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这种情况很正常，梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。
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tsgxliy1
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2008/8/21 23:35:05 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看下图谱啊,怎么没有啊?我想是不是洗脱的时候样品有分解,有的样品被洗脱的缘故.
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nnsss
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2008/8/22 8:21:56 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最好用梯度级试剂
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Easy-Boy
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2008/8/22 8:30:17 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xy200609 发表:
这种情况很正常，梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。

同意，是会有杂质或空白峰。正常。
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maddog
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2008/8/22 8:32:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议作一个空白比对以及样品空白比对，有了这两张图之后就可以对自己的基线漂移进行判定了，是溶剂进行梯度切换时带来的影响，还是样品杂质？
一般的说作梯度时基线是有一定的漂移的，这具体漂移多少算过量，还要具体情况具体分析～特别是像你的流动相里还有盐。
主要是现在没看见图谱，不好说～
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冷咖啡
loveofsimao
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2008/8/22 8:44:39 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的GPC在平衡时,基线也漂移的厉害,资料上讲跟温度不稳定或流动相被污染有关系!
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lvmaotu
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2008/8/22 9:36:31 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
遇见过这种情况，换了高纯度的有机溶剂、水，基线明显改善。不过没用过缓冲盐做梯度，对色谱柱损伤很大。
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