高效液相色谱法测定动物组织和牛奶中苯并咪唑类残留量
(EEC, 确证法Determination of Benzimidazoles at Residue Levels in Animal Tissues and Milk
(EEC, Cy4.1 Confirming Method)
引言
苯并咪唑类是具有普通苯并咪唑结构的一类物质, 包括氧苯达唑(Oxyfendazole), 苯硫达唑(Fenbendazole), 噻苯咪唑酯(Cambendazole), 噻苯达唑(Thiobendazole),丙硫咪唑(Albendazole). Fenbantel 作为兽药, 在动物体内很快代谢成苯并咪唑类化合物。苯并咪唑在食用动物上被用于防治体内寄生虫. 其剂型有口服液剂、悬浮剂、片剂.。
欧盟制定的苯并咪唑类的最高残留限量MRL列于第2部分.
1 主题内容
本分析方法描述了测定动物源样品中苯并咪唑残留量的方法.
2 适用范围
本方法可用于牛奶和肝脏中的苯并咪唑残留量检测. 苯并咪唑最小检测限为0.02mg/kg动物组织;0.02mg/L牛奶.
3 参考资料
93/256/EEC 委员会决议,拟定的检测激素类或有甲状腺抗拮作用的物质的方法[ OJ. No.L.118,14.4.93. pp 64-74]
ISO78/2-1982: 标准的制定- 第二部分:化学分析标准.
MAFF,1989, 动物组织和牛奶中残留的苯并咪唑的测定方法. Food Science Laboratory, Colney Lane, Norwich. 标准操作程序.
Marti,A.M., Mooser, A.E. and Koch H.(1990), 肉样中苯并咪唑类的测定方法, J. Chromatogr. 498, 145-157.
4 定义
苯并咪唑含量是指测定的苯并咪唑类物质的总量, 按该法测定,不论该类化学物质的结构如何, 以每kg或每L测试样品中苯并咪唑的mg或μg表示.
5 方法提要
该方法由6步组成:
—在缓冲液中将组织样品均质
—用有机溶剂萃取
—以固相硅胶柱净化
—反相C18柱萃取
—HPLC荧光紫外检测器测定(参见GC-MS确证)
—用内插法从标准曲线计算苯并咪唑含量,同时考虑苯并咪唑的回收率,尤其是组织样品。
注: 在瑞士研究的方法中, HPLC测得的阳性结果必须将苯并咪唑衍生为甲基或五氟苯基衍生物后用GC-MS确证.
6 试剂
6.1.1 三氯甲烷
6.1.2 丙酮
6.1.3 氢氧化钠, 0.1 mol/L
6.1.4 甲醇,重蒸馏
6.1.5 乙酸酐
6.1.6乙腈:HPLC级
6.1.7乙酸乙酯
6.1.8 正己烷
6.1.9 甲苯
6.1.10 磷酸二氢钾
6.1.11 碳酸铵
6.2 溶液
6.2.1 0.25 mol/L 磷酸盐缓冲溶液,pH7.0:称取34g磷酸二氢钾溶于900mL水中, 用0.1mol/L 氢氧化钠调pH至7.0并定容至1L。
6.2.2 0.1mol/L碳酸铵溶液: 称取15.7g碳酸铵溶于水中并定容至1L.
6.2.3 正己烷-三氯甲烷(60:40):将60mL正己烷和40mL三氯甲烷混合
6.2.4 HPLC流动相: 将400mL正己烷加入600mL 0.1mol/L碳酸铵溶液中. 将溶液混合,真空过滤, 超声减压脱气.
6.3 标准样品
苯并咪唑标准物质包括:
6.3.1 噻苯达唑
6.3.2 阿苯达唑
6.3.3 氧苯达唑
6.3.4 卡苯达唑
6.3.5 储备液: 溶解5mg苯并咪唑类于100mL甲醇,在4C储存,每月新配一次.
6.3.6 标准工作液
6.3.6.1 移取1mL储备液, 稀释到100mL ,浓度为0.5μg/mL. 在4C储存,每周新配一次.
6.3.6.2 移取0.5mL储备液, 稀释到100mL ,浓度为0.25μg/mL. 在4C储存,每周新配一次.
6.4 样品添加程序
6.5 在5g 样品中,加入1mL工作标准溶液,放置15分钟.