主题：【求助】新购买了一根氨基柱怎么使用呢

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jingjingkitten

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发表于：2009/02/16 20:36:56 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

新手上路，请教各位：新买来一根Alltima NH2 HPLC柱，保存溶剂是5%乙醇95%正己烷，能否直接使用呢？我想用做反相分析，流动相中可能添加缓冲盐，使用之后应怎样冲洗柱子呢，实验完毕之后又应该怎样保存呢，之前有看到高人的贴子，虽获益匪浅，但还是想有高人具体解答一下。另外，我做反相分析，预柱是用反相的还是正相的？有要求吗？还有，在分析过程中包括样品前处理过程中都所用到的溶液必须是色谱级吗？例如我要用NaOH水溶液配制对照品溶液，NaOH也要色谱级吗？急盼指教！不盛感激！

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2009/2/16 21:22:39 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 jingjingkitten 发表:
新手上路，请教各位：新买来一根Alltima NH2 HPLC柱，保存溶剂是5%乙醇95%正己烷，能否直接使用呢？我想用做反相分析，流动相中可能添加缓冲盐，使用之后应怎样冲洗柱子呢，实验完毕之后又应该怎样保存呢，之前有看到高人的贴子，虽获益匪浅，但还是想有高人具体解答一下。另外，我做反相分析，预柱是用反相的还是正相的？有要求吗？还有，在分析过程中包括样品前处理过程中都所用到的溶液必须是色谱级吗？例如我要用NaOH水溶液配制对照品溶液，NaOH也要色谱级吗？急盼指教！不盛感激！

1，首先，先查一下这个柱子是否可以用作反相，大部分氨基柱是可以两相使用的，但是查一下最好。
2，正相过度到反相，用异丙醇冲洗三十倍柱体积以上，鉴于异丙醇洗脱时压力很大，可以考虑0.5ml的流速洗三个小时以上。
3，反相中你的有机相是甲醇或乙腈？换上纯的甲醇或乙腈洗一个小时。
4，上缓冲盐前的准备，用甲醇/乙腈：水，水比例在50%以上。冲柱子30分钟以上。然后上缓冲盐，稳定到可以进样。
5，预柱的使用要和条件一致。正相就用正相的预柱，反相就用反相的预柱。如果你有和柱子填料一致的预柱最好。使用时接在柱子前按上述步骤一起处理。如果没有，就拿常见的C18做预柱好了。第三步时将其接入系统平衡即可。
6，前处理的试剂有钱的话就用色谱级的，不过一般情况下不需要，在配样的最后一步或倒数第二步用上色谱级的试剂就可以了。其他分析纯就行。NaOH一般不需要找色谱级的，除非你的样品很特别或要求很高。

以上处理过程，是处于对新柱子的保护，时间都比较长，实际操作时可根据需求适当降低操作时间，但是冲洗时间不要打折太多。

实验完毕后，如果以后作反相用，用10%乙腈/甲醇的水溶液冲洗柱子40-60分钟（根据缓冲盐的种类和浓度增减时间），然后用纯乙腈/甲醇冲洗40-60分钟保存柱子即可。如果接下来要做正相，那就纯乙腈/甲醇洗后，异丙醇再洗1个小时，然后用95以上的正己烷：异丙醇（色谱级的乙醇不太常见）洗一个小时保存。

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