主题:【求助】安捷伦1200LC测定草酸求助

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ttxiangshang
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大家好,第一次做液相,想请教各位一些问题,非常感谢各位的解答。

我先把基本情况介绍一下:
安捷伦 $$lc 1200 测定草酸,草酸(优级纯),所有用水均用超纯水配制。

测定条件:0.5mL/min(压力:50bar),柱温恒定30.0℃,停留时间15min,
        pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为55:45。

柱子:Luna 5µ C18(250mm*4.6mm*5µm)

(文献上的方法是:用C18的(250mm*4.6mm*5µm),流速1.0mL/min,柱温:30℃,停留时间3min,pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80:20,我按照这种方法做不出来,三分钟太短,峰都还没有出来.)

出峰时间随浓度不同而有变化,
1 ppm的时候在11.533min峰面积是100%,
5 ppm的时候在8.707和11.519min时均有峰,峰面积分被是70%和30%,
10 ppm的时候在8.706和11.532min时峰面积分别为78&和22%。

改变了溶液和乙腈的体积比(从80:20,75:25,70:30,65:35,60:40,55:45,50:50),发现只有55:45时出的峰要少点,峰面积在尖峰处要大些(我不懂如何判定什么样的峰才是比较好),改变流量,从0.3,0.4,0.5,0.6,1mL/min发现1mL/min压力有110左右,后面还是用了0.5。

想请教的问题是:
    如何摸索测定草酸的最佳条件,需要改变哪些参数,如果各位有做过相关的或是能给我宝贵意见的,十分感谢。

我知道很多基础的东西还需要学习,我也正在学习,想借助论坛的平台和有经验的网友交流,谢谢。

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原文由 ttxiangshang 发表:
大家好,第一次做液相,想请教各位一些问题,非常感谢各位的解答。

我先把基本情况介绍一下:
安捷伦 $$lc 1200 测定草酸,草酸(优级纯),所有用水均用超纯水配制。

测定条件:0.5mL/min(压力:50bar),柱温恒定30.0℃,停留时间15min,
        pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为55:45。

柱子:Luna 5µ C18(250mm*4.6mm*5µm)

(文献上的方法是:用C18的(250mm*4.6mm*5µm),流速1.0mL/min,柱温:30℃,停留时间3min,pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80:20,我按照这种方法做不出来,三分钟太短,峰都还没有出来.)

出峰时间随浓度不同而有变化,
1 ppm的时候在11.533min峰面积是100%,
5 ppm的时候在8.707和11.519min时均有峰,峰面积分被是70%和30%,
10 ppm的时候在8.706和11.532min时峰面积分别为78&和22%。

改变了溶液和乙腈的体积比(从80:20,75:25,70:30,65:35,60:40,55:45,50:50),发现只有55:45时出的峰要少点,峰面积在尖峰处要大些(我不懂如何判定什么样的峰才是比较好),改变流量,从0.3,0.4,0.5,0.6,1mL/min发现1mL/min压力有110左右,后面还是用了0.5。

想请教的问题是:
    如何摸索测定草酸的最佳条件,需要改变哪些参数,如果各位有做过相关的或是能给我宝贵意见的,十分感谢。

我知道很多基础的东西还需要学习,我也正在学习,想借助论坛的平台和有经验的网友交流,谢谢。



呵呵。也感谢与大家交流。
一般如果色谱条件改变一点,峰面积肯定是不同的。有的是因为最大吸收问题,有的是流动相极性的不同。
一般最好是选用标准(药如典)的方法来做,这样做才具有比较性,如果标准上的做不出来,可以在标准的基础上做一些改变。但最好检测波长不做改变,可以调整流动相比例,1mL/min发现1mL/min压力有110左右,压力不不大的。不用担心。
老多_小多
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用C18的(250mm*4.6mm*5µm),流速1.0mL/min,柱温:30℃,停留时间3min,pH=2.5的磷酸缓冲溶液与乙腈的体积比为80:20,这个条件不可能做的出来,草酸不不保留的物质,而方法的比例乙腈20%,本身就有问题
ttxiangshang
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我再查查资料,有问题再贴上来向大家请教,谢谢!
wenyan-lu
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不用乙腈,纯酸性盐溶液好了,选个耐纯水的C18柱,柱温低一点更好;草酸应很灵敏的
深海游鱼
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