主题：【求助】也问问定量环的问题

最好把你问的图截下来

1.还不知道说哪个图
2.本次注射进去多余的
3.流动相冲一般是指测定时的情况吧，做完了应该是你说的情况
4.如果是20ul的环，要保证不跑到废液管，你的针一定要没气泡

原文由 ripplelj 发表:
刚看了 【求助】关于进样口定量环（HPLC） 这个贴子http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090505/1873921/，发现自己很多问题。
我用岛津的，定量环为20ul，仪器自配的针是25ul的。每次都是吸满，大约也得30ul进样。看到上面那个帖子中提到，这样的误差很大。看了帖子中4楼的幻灯片，努力的去理解了，可是还是不是很懂。
1.定量管外的废液管是2根，我在Load位置进样后，废液是从左侧的管子流出；清洗管路，在Inject注射时，废液从右侧管子流出。这个有什么区别吗？
2.Load位置进样时，每次进样都有废液流出，那么流出的废液是前一次遗留的，还是本次注射进去多余的？
3.因为是借的仪器，负责的说每次做完要用重蒸水冲洗进样口，我每次都是用大概10ml重蒸水冲洗。可是上面的帖子中提到，最好用流动相冲洗。这个不是很明白。用重蒸水冲洗是为了清洁，那么用流动相冲是为什么呢？这不是相当于在污染进样口吗？
4.也曾经试过进样10ul来定量，但是针管很细小，感觉很难控制。而且有个问题，这10ul的进样量，是全部都进入柱子中了？还是也会有部分跑到废液管里？

这么多.回答起来很累呀，7725i手动进样器:
1、Load位置废液从6号管出，针所对的是4号孔，Inject位置，废液从5号管出，针所对的也是5号孔。
2、Load位置插入针时，流出的废液是定时环的流动相，和上次残留的样品，Inject位置插入针时，流出的仅是上次残留的样品。
3、清洗液先用能溶解样品和能与流动相互溶的溶剂，最后用纯有机相冲洗。
4、10UL全部进入流路。

这么多.回答起来很累呀，7725i手动进样器:
1、Load位置废液从6号管出，针所对的是4号孔，Inject位置，废液从5号管出，针所对的也是5号孔。
2、Load位置插入针时，流出的废液是定时环的流动相，和上次残留的样品，Inject位置插入针时，流出的仅是上次残留的样品。
3、清洗液先用能溶解样品和能与流动相互溶的溶剂，最后用纯有机相冲洗。
4、10UL全部进入流路。

想问一下关于第二点，“Load位置插入针时，流出的废液是定时环的流动相，和上次残留的样品”，关于定量环的残留问题，该怎么解决啊？
最近发现定量环残留很厉害，每次做样都有上次样的残留，不同的样，影响很大的。

一般用纯甲醇或已经来冲洗，如果是用了缓冲液的需要用双蒸水冲，长期不用，用有机相保存。

原文由 fengxuemei 发表:
这么多.回答起来很累呀，7725i手动进样器:
1、Load位置废液从6号管出，针所对的是4号孔，Inject位置，废液从5号管出，针所对的也是5号孔。
2、Load位置插入针时，流出的废液是定时环的流动相，和上次残留的样品，Inject位置插入针时，流出的仅是上次残留的样品。
3、清洗液先用能溶解样品和能与流动相互溶的溶剂，最后用纯有机相冲洗。
4、10UL全部进入流路。

想问一下关于第二点，“Load位置插入针时，流出的废液是定时环的流动相，和上次残留的样品”，关于定量环的残留问题，该怎么解决啊？
最近发现定量环残留很厉害，每次做样都有上次样的残留，不同的样，影响很大的。
每次进样前和进样结束后，用甲醇和水冲洗进样口和定量环

请看下列对于你提出的问题的回复：
1.定量管外的废液管是2根，我在Load位置进样后，废液是从左侧的管子流出；清洗管路，在Inject注射时，废液从右侧管子流出。这个有什么区别吗？
此处建议自己去研究下LOAD与INJECT状态下的流路，你就会明白了，最好看看流路图，上网一搜很多的。

2.Load位置进样时，每次进样都有废液流出，那么流出的废液是前一次遗留的，还是本次注射进去多余的？

手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；


3.因为是借的仪器，负责的说每次做完要用重蒸水冲洗进样口，我每次都是用大概10ml重蒸水冲洗。可是上面的帖子中提到，最好用流动相冲洗。这个不是很明白。用重蒸水冲洗是为了清洁，那么用流动相冲是为什么呢？这不是相当于在污染进样口吗？
流动相是为了清洗残留在进样阀中的样品，如果直接用水，可能会有物质析出，这样会导致进样阀出现问题

4.也曾经试过进样10ul来定量，但是针管很细小，感觉很难控制。而且有个问题，这10ul的进样量，是全部都进入柱子中了？还是也会有部分跑到废液管里？

如果手动进样，请采用定量环控制进样量，靠进样针式不可靠的.很简单，针肯定没经过计量确认，而且进样过程会由于操作原因导致不平行。淡然，如果换自动进样器，什么都解决了！

附流通阀的一些知识：
六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。



工作原理：

    1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出；

    2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。

    虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。



  以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：

    1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。

    2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75％，如20gL的定量环最多进样15p,L的样品，并且要求每次进样体积准确、相同；使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20gL的定量环最少进样60至1001aL的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。

    3、可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上10gL的定量环，实际是9gL还是1lgL并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。

  4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0．45~tm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。

原文由 ripplelj 发表:
刚看了 【求助】关于进样口定量环（HPLC） 这个贴子http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090505/1873921/，发现自己很多问题。
我用岛津的，定量环为20ul，仪器自配的针是25ul的。每次都是吸满，大约也得30ul进样。看到上面那个帖子中提到，这样的误差很大。看了帖子中4楼的幻灯片，努力的去理解了，可是还是不是很懂。
1.定量管外的废液管是2根，我在Load位置进样后，废液是从左侧的管子流出；清洗管路，在Inject注射时，废液从右侧管子流出。这个有什么区别吗？
2.Load位置进样时，每次进样都有废液流出，那么流出的废液是前一次遗留的，还是本次注射进去多余的？
3.因为是借的仪器，负责的说每次做完要用重蒸水冲洗进样口，我每次都是用大概10ml重蒸水冲洗。可是上面的帖子中提到，最好用流动相冲洗。这个不是很明白。用重蒸水冲洗是为了清洁，那么用流动相冲是为什么呢？这不是相当于在污染进样口吗？
4.也曾经试过进样10ul来定量，但是针管很细小，感觉很难控制。而且有个问题，这10ul的进样量，是全部都进入柱子中了？还是也会有部分跑到废液管里？

1、在LOAD状态下，废液是不经过定量环的，在Inject状态下，废液是从定量环里出来的，两者不一样
2、还是那句话，在LOAD状态下，废液是不经过定量环的，在Load状态下进样是白费的，而且很容易污染进样口使进样不准确
3、进样口可能会残留上一次的样品，如果用水冲的话可能把水带进色谱柱导致出现负峰
4、进样10微升时，进样要平稳，速度要均匀，不要太快，否则容易产生湍流把样品冲出定量环，只要注意一下是不会让样品流入废液管的