主题:化学发光联用技术-HPLC-CL

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zj7610
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液相色谱化学发光分析
    化学发光分析法以其仪器简单、操作方便、分析快速、灵敏度高、线性范围宽等显著的优点备受人们青睐,是一种有效的微量和痕量分析技术。然而,化学发光反应固有的选择性差的缺点使得这种分析方法受到了极大的限制。如何将高灵敏度的化学发光法和高选择性的分离技术结合,是分析化学发展的一个前沿方向。
    高效液相色谱是近三十年发展的一种分离技术。它具有分离效率高、分析速度快、自动化强等特点,是石油、化工、环保、医药、生化等部门科研和生产中分离检测的一个重要工具。
    高灵敏度的化学发光检测手段与高分辨力的高效液相色谱法(HPLC)耦合于一体,将成为一种理想的分离分析方法—液相色谱化学发光检测法(LC-CL),即通过液相色谱分离系统分离混合物中的各组分,利用化学发光检测系统对各组分进行测定.
1974年,Hartkopf等首次报道了液相色谱化学发光检测法,20多年来,这种技术得到了飞速的发展,已广泛用于冶金、化工、环保、生物、医学、药学和临床等方面复杂、低含量组分的分析。McGown等在关于分子发光光谱的评述中,专节介绍了各种色谱法中发光检测技术的进展。其他学者也对其基本理论及应用进行过讨论.于LC-CL的综述还有:LC和流动注射发光检测法的分析应用[基于各种液相CL反应的LC-CL检测法;高效液相色谱一化学发光检测法的生物医学应用;CL检测中所用固定化技术及固态试剂;CL衍生反应及所用衍生试剂,于糖类、类酯类氢过氧化物等物质的CL检测等。

高效液相色谱化学发光检测系统
    液相色谱化学发光检测系统包括了色谱分离和发光检测两个部分,
该仪器包括输液泵、色谱柱、混合器、阻尼器和化学发光检测器(流通池、光电倍增管和记录仪)等5个主要组成部分。待测组分经色谱柱分离后与发光试剂和过氧化氢溶液混合,产生化学发光反应,流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大,最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源,消除了光源不稳定和杂散光的干扰,另外直接检测发光强度,故灵敏度一般比荧光检测法高两个数量级。

化学发光和色谱联用,解决了化学发光选择性差的问题,在各个方面有较为广阔的应用前景。由于其具有的高灵敏度和分辨率,今后必将成为非常有效的痕量及超痕量分析的有效手段。但某些化学发光反应体系与色谱体系耦合的条件还需要进一步研究和优化。拓宽分析物的范围、化学衍生、标记及固定化酶技术的深入研究是此类分析方法的重要发展方向。
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HPLC-CL的进样量就用常规的 20ul, 不过在摸条件时我一般用100ul的,当流动相对发光体系有湮灭效应时尽量能得到发光信号
CE-CL的进样量一般是10nl,
联用时主要问题就是峰的扩展,理论上采用细管径的玻璃管可绕制成很好的流动池。其他的流动池发光面积太小,影响检测灵敏度。
wolf007_1
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