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液质联用（LCMS）

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主题：【已应助】【求助】能不能用带有缓冲盐的水相冲洗柱子中的残留

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karsyer

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发表于：2009/07/07 17:20:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

现在有一个疑问想请教老师们，仪器LC-MS，分别是安捷伦1100，AB 3200，LC-MS。
做的是药代动力学，因为样品前期处理是用的简单的乙腈沉淀蛋白后进样，洗脱梯度是乙腈：1mM甲酸铵（60：40），现在走完一条标曲（8个点）、一套指控（4个点）之后，走一个人的样品（13个点），再走质控合格。
继续再走一个人的样品后，质控就无法合格了。只能用水比例较大的流动相冲洗半小时到一小时，之后质控就能合格了。我想问在用水比例较大的流动相冲洗时，能不能直接用带有缓冲盐的水相，也就是用乙腈：1mM甲酸铵（10：90）冲洗，这样可以节省很多的平衡时间。
我还没有试，望高手指点

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2009/7/7 21:33:11 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果不是为了冲洗后保存柱子，而单纯只是想减小柱子内的基质残留（你说的“再走一个人的样品后，质控就无法合格”应该是样品基质残留），用缓冲盐的水相冲是可以的。不过这个也要看你冲过后是否达到你预期的效果，如果单纯用缓冲盐的水相冲后你的质控能合格就没问题。
我觉得走完一个人的样品后多用流动相（乙腈：1mM甲酸铵60：40）再多平衡20-30min应该同样也能达到预期的效果。

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风之彩

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2009/7/7 22:18:57 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你说的质控不合格是什么原因引起的？是不是像楼上说的样品基质残留引起的？
如果是，那么只能说明你的方法不合适，前处理方法有待改进，因为你的方法不适合大批量进样。
如果你只是自己做做课题，看看实验结果，又不想改方法，还不怕麻烦，那么你就进一点，冲一会柱子；如果你的方法是新的，还可能发个方法学的文章什么的，那最好还是改进一下，这部分内容可以加入讨论；如果你的数据要用来报批，那么最好还是不要这么做，指导原则里面对于一个分析批的定义，好像还没有说中间可以冲会柱子什么的。

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karsyer

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2009/7/8 17:08:10 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

增加了5分钟的平衡的时间，但是结果质控也不能合格。
我们估计可能是基质残留引起的，但是因为已经做了很多样品，是做的项目，时间上来不及了。

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karsyer

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2009/7/8 17:11:59 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 juju11 发表:
你说的质控不合格是什么原因引起的？是不是像楼上说的样品基质残留引起的？
如果是，那么只能说明你的方法不合适，前处理方法有待改进，因为你的方法不适合大批量进样。
如果你只是自己做做课题，看看实验结果，又不想改方法，还不怕麻烦，那么你就进一点，冲一会柱子；如果你的方法是新的，还可能发个方法学的文章什么的，那最好还是改进一下，这部分内容可以加入讨论；如果你的数据要用来报批，那么最好还是不要这么做，指导原则里面对于一个分析批的定义，好像还没有说中间可以冲会柱子什么的。

怎么能确定就是基质残留引起的？我们估计是这样，所以希望能改变一些流动相的冲洗条件，使能达到大批量测定的效果。现在时在做I期临床的课题，时间上也有限制，已经做了不少人的了，来不及改动制备方法。
如果不能作为一个分析批，那怎么办啊，难道每一个人的药代曲线都需要重新做一个标曲么……

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贝壳里的海

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2009/7/8 18:39:02 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

建议你在梯度洗脱设置里，在原来的进样方法时间之后加一个“梯度”，这个“梯度”时间段内，把流速调高，这样可以缩短时间。你的方式加大缓冲盐水相比例，可以尝试，但是你冲洗完，还得用60：40的比例平衡柱子，平衡时间不知道要多长时间，如果很长，那这样折腾没有意义，如果很短时间就可以平衡好，那就可以把流速调高和增大缓冲盐水相相结合，创造一个更理想的效果。

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雾非雾

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2009/7/8 20:37:06 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 karsyer 发表:
我想问在用水比例较大的流动相冲洗时，能不能直接用带有缓冲盐的水相，也就是用乙腈：1mM甲酸铵（10：90）冲洗，这样可以节省很多的平衡时间。

个人认为肯定行的，这个比例我们LCMS也用过，不过是乙酸铵。甲酸铵一定要买特纯的，我们以前买的纯度不够，就经常会堵CDL，后来买sigma的高纯的就不堵了。

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风之彩

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2009/7/9 11:39:33 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

不知道你的方法学是怎么做的？当时没有发现这样的情况？
像你这样的情况比较麻烦了，质控样品不合格，超过一定的比例，你整个分析批的样品都作废了，你也不能随便改你的方法，不然和方法学对不上，还是不行的，就算改，也要别人看不出来才行。你中间加入平衡时间，到时候如果专家较真，就会问为什么连续的两针进样时间间隔会不对？
不行还是宁愿多冲柱子，多进标曲吧，一个分析批不要进太多的样品了。

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