主题：【第二届网络原创作品大赛】一次液相色谱柱压分析（9月）

摘要：在液相分析过程中，通常会出现随着使用时间的延长，色谱柱压慢慢上升的现象，所以每次做完样品分析之后都会用流动相继续冲洗整个系统。柱压在一定程度上反映了色谱柱的的分离效果，但如果流动相使用正确，足够长的冲洗时间之后，柱压还一直“居高不下”（比开机时柱压高很多）的情况出现，这就需要我们仔细分析原因，有针对的采取措施，以求尽可能地恢复其使用前的状态。

简介：岛津10AT液相色谱仪、4.6×150mmC18柱、
温度：24℃  湿度：40%
样品：农药50%烯酰吗啉水分散粒剂（甲醇溶解定容后离心，取上清液）  流动相：甲醇+水=90+10  波长：220nm  流速：1mL/min

1.问题出现
开机柱压4.0MPa(流动相100%甲醇)，分析过程中柱压6.2-7.0MPa(流动相甲醇+水=90+10)，分析后柱压5.7MPa（流动相100%甲醇冲洗半小时之后）

2.分析问题
造成柱压升高的原因有很多，通过查阅资料主要表现在以下方面：
1）流动相过滤不良
  这往往是由于流动相没有过滤，或者虽然已经过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏，使得固体杂质滞留于滤板上所造成的。致使柱的进口滤片处堵塞，压力升高。
2）霉菌生长
霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长，堵塞滤板，导致压力升高。这种现象在夏天，尤其是使用磷酸盐缓冲液为流动相时更易发生。在夏季使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。即使保存在冰箱中，一般也不要超过两天。否则，即使不堵塞滤板，也会因细菌或霉菌孳生而产生的代谢物造成对样品的干扰。
3）非特异性吸附     
当溶质在柱子上有较强的非特异性吸附，且当前所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
4）更换流动相时置换不彻底     
致使流动相不互溶
5）盐晶体的析出     
更换流动相后，缓冲液在新的流动相体系溶解度低而析出
6）样品的沉淀     
配制样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入柱中溶解度可能降低而析出
7）压力脉冲     
运行过程中，有时会产生系统内压力的突然升降。如，转动进样阀时动作过缓，造成液流堵塞再瞬间释放；开机瞬间压差较高等。压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化。填料微屑的长期累积可能会使柱床阻力增大。

3.寻找原因
综合分析后从在线过滤片阻塞和样品阻塞两方面考虑问题：
1）使用的流动相均经0.45μm滤膜过滤，整个系统柱前压为0.2MPa，判断在线过滤器没问题，问题不在于流动相。
2）单独接色谱柱（不接保护柱）柱压为3.8MPa(流动相100%甲醇)，单独接保护柱（不接色谱柱）柱压为1.8MPa(流动相100%甲醇)，正常情况下保护柱柱压极低，判断保护柱可能脏了，问题应该在于样品。

4.解决问题
1）清洗保护柱：将保护柱卸下后分别用稀酸——水——异丙醇——水超声清洗各15min。将清洗过的保护柱重新装上后，单独接保护柱（不接色谱柱）柱压为0.8MPa(流动相100%甲醇)，再装上色谱柱整个系统柱压为4.4MPa(流动相100%甲醇)，与开机前柱压大致相同。
2）样品取上清液后需经0.2μm滤膜过滤

5.工作总结
色谱柱是液相的核心部件，柱压升高在一定程度上可以我们使用过程中是一个信号，要即时发现并处理问题。在线过滤器用于免除流动相的影响，保护柱代替色谱柱捕集样品中的杂质，防护工作到位了，色谱柱的使用寿命也会延长。