主题：【已应助】【求助】孔雀石绿回收率如何提高

原文由 qing2009(qing2009) 发表:
好的，实在不行我就分部添加回收。
另外，其实我也曾浓缩完就上机试过，浓缩完后将残留物溶解，微孔滤膜过滤后上机，但是回收率没有过柱子的好，请问您用的洗脱液是什么？

原文由 capinter(capinter) 发表:
我是做的水产品检测，没有发现不好分层的情况，萃取时震荡时间长一点，要充分震荡分层会比较好。
可以在各个步骤分别添加回收，试验一下回收率是在哪步损失掉的。

原文由 kmq(kmq) 发表:

我觉得问题出现在二氯甲烷萃取那一步，这儿有个很关键的点，就是二氯甲烷、乙腈和水的比例，一定要多加点二氯甲烷，减少水相
这样的话不难分层，而且即便直接旋干也不会太浑浊。我一般过个中性氧化铝的柱子之后就非常非常干净了！
    你可以试试，等待你的效果

原文由 qing2009(qing2009) 发表:

谢谢，我的二氯甲烷是25ml 乙腈是50ml（25ml 两次），分液漏斗中的水是50ml，没有加上开始加入的HAH， p-TSA，和Ammonium acetate， 这三种加起来是8ml, 应该算在乙腈里，所以乙腈应该是58ml。
我觉得您说得很有道理，分层的清楚与否直接回收率，有时候同一样品，同样浓度，同时做，回收率相差很大，我一直想不明白是什么原因导致的，不知道您有没有遇到过类似的情况？
另外问您的二氯甲烷、乙腈和水的比例是什么？

原文由 kmq(kmq) 发表:
  具体的比例我也不是很精确，因为加二氯甲烷的时候我不是特别精确，有时候多一点有时候少一点，但保证几个样品平行加入。大概是乙腈如果是30mL的话，二氯甲烷就应该大于30ml,而水尽量控制在20ml左右。我觉得水没必要那么多，萃取的效果也能达到的。你可以大体再试试，希望这次能成功啦

原文由 qing2009(qing2009) 发表:
震荡 离心 上清液加入分液漏斗（内有50ml 水+2ml 二甘醇）

原文由 qing2009(qing2009) 发表:

原文由 kmq(kmq) 发表:
  真是郁闷了，我今天刚做完，但是有一个样品还是回收率很低（45%），而且我是平行三次做的。很是郁闷。这次我减少了水量，不过分层分的极不好，看这个分层我就觉得没戏了，果然是很低。但是只有这个样品这样，其他的没有问题。所以很迷惑，不知道到底问题出在哪里，因为我之前作过这个样品，还有过好的回收率，偶而的一次，我也不知道是哪里一个关键点，晃完了以后分层很快很明显，然而平行的几个就都不行。我现在很想问一下，您觉得分层主要取决于什么？

我每次分层都不错啊，这样吧，要不你再试试先把鱼的蛋白去除一下，可以加一点乙酸铅，离心之后再萃取。对了，我跟你不同的是我没用二甘醇，我也没用硅藻土，难道这个也有关吗？
  你试试乙腈24ml：二氯甲烷40mL:水20ml，我觉得应该比较好分层啊，虽然下层有些浑浊，但是没关系，再过个柱就可以啦，再试试吧