高效液相色谱仪常见的选择性检测器有:紫外-可见光检测器、光电二极管阵列检测器、荧光检测器。1紫外-可见光检测器或紫外检测器,是
液相色谱应用最广泛的检测器。可测量190nm~350nm范围的紫外光吸收变化,也可在可见光范围350nm~700nm内测量。其工作原理是基于光的吸收定律朗伯-比尔定律(A=-lgT),通过测定样品在检测池中吸收紫外-可见光的大小来确定样品含量的。为了定量计量方便,通常检测器中采用对数放大器,将透过率转换成吸光度,仪器输出的信号与样品浓度成正比。所以,紫外-可见光检测器属于浓度敏感型检测器,具有灵敏度高、受操作条件和外界环境影响小、适于进行梯度洗脱、结构相对简单、使用维修成本低等特点。其灵敏度可达到0.001AU,噪声小于1.0×10-5AU,对紫外光吸收不强的最低检测浓度为1.0×10-10g/ml的样品也有一定检出能力。
2 光电二极管阵列检测器又称光电二极管矩阵检测器,该检测器作为紫外-可见光检测器的发展,在
液相色谱峰纯度检验和色谱峰定性方面有更广泛的应用。在检测器结构与光路安排上与紫外-可见光检测器有很大区别,光电二极管阵列检测器是由光源发出光线通过样品池,然后由一系列分光技术,使所有波长的光在检测端同时被检测,得到时间、光强度和波长的三维谱图。而紫外-可见光检测器是由光源发出光线经过滤光片、棱镜或光栅分光,使单色光进入样品池,再由光电倍增管检测。两检测器结构中样品池与分光原件位置相反。
光电二极管阵列检测器在实际应用中可以同时检测出多个波长的色谱图,宽谱带检测并计算不同波长的相对吸光度,所以一次进样就能将所有样品组分信息检测出来,得到的三维立体谱图可直观、形象地显示组分的分离情况及各组分的紫外-可见吸收光谱。由于每个组分都有全波段的光谱吸收图,因此可以利用色谱保留值规律及光谱特征吸收曲线综合进行定性定量分析。目前,光电二极管阵列检测器的波长范围为190nm~950nm基线噪声最低可达到3.0×10-6AU。
3荧光检测器荧光检测器是通过测量化合物的荧光强度进行检测的
液相色谱检测器。其利用化合物的光致发光现象,化合物在受到入射光照射,吸收辐射能后发出比吸收波长长的特征辐射。当入射光停止照射,特征辐射也快速消失。荧光检测器由激发光源、激发光单色器、样品池、发射光单色器和检测发光强度的光电检测器组成。光源发出的光,经激发光单色器后,得到所需要波长的激发光。激发光通过样品池被荧光物质吸收。荧光物质激发后,向四面八方发射荧光。为消除入射光与杂散光的影响,一般取与激发光成直角的方向测量荧光。荧光至发射光单色器分光后,单一波长的发射光由光电检测器接收。
因为不是所有化合物在选择的条件下都能发生荧光,所以荧光检测器不属于通用型检测器。与紫外-可见光检测器相比应用范围较窄。荧光检测器是最灵敏的
液相色谱检测器,特别适用于痕量分析,最小检测量可达10-13g,线性范围一般为104~105,其良好的选择性可以避免不发荧光的成分的干扰,成为荧光检测的独特优点只要流动相不发射荧光,荧光检测器就能适用于梯度洗脱。现在荧光检测器主要应用于药物生化分析、环境及生物科学等领域并起着不可替代的作用。