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七、问题
1、用5%甲醇冲洗AQ极限色谱柱出来比较多色谱峰,这些峰可能来自哪里?
2、采用流动相走基线的时候,极限XB色谱柱出峰最多,峰高也是最大的。具体原因还不是很清楚?
3、XB和AQ色谱柱最大耐受压是多少?AQ色谱柱如果不用纯水系统,可否当XB来使用?(如果色谱图没有太大差异)
我这么想的:1、2这两个问题可能是来源于同一个问题,就是关于固定相流失的问题。大部分反相柱是不适合用高水相流动相洗脱的(除了几款特殊的可用纯水做流动相的色谱柱),水相太高,容易把硅胶小球上的键合相溶解,溶解下来的成分被检测器检出;当换成楼主测样的流动相时,流动相的洗脱能力比5%甲醇能力强,把溶解下来的成分进一步洗脱出,造成峰更多更高。因为每个厂家色谱柱的键合相不同,被水溶解的程度也不同,表现在谱图上也就不同。如果要验证是否是固定相流失问题,好像也挺简单,就是色谱柱刚拿到手的时候按标准方法测试一下柱效,待您这个实验做完后再用同一方法条件测一次柱效,如果前后相差较大,则证明是固定相流失的问题。可惜我也是做销售的,苦于没有仪器不能亲自验证。
随想随说,还望指教啊。
这种解释好像也有一定的道理,但如果是这样的话,键合相这么容易就溶解了,那么用一两年的柱子也就根本不存在了,因为反相条件一般都是含水的,但事实是这样的柱子很多,所以也感觉不太对。后面所说的验证方法我觉得不妥,如果这么冲一下前后柱效就相差很大,我们的柱子能卖给谁啊,就算白给您也不会要的是吧呵呵。。。
据我所知,微球键合的技术,这个是大品牌色谱柱的卖点。键合相不容易溶解,只是在特定的条件下,比如在高水相(一般有机相不超过10%)条件下,长时间冲洗时,碳链是容易被溶解掉的,而当有机相含量是0即纯水时,被洗脱下来的几率就更大。化学反应,是需要条件的。
“如果这么冲一下前后柱效就相差很大,我们的柱子能卖给谁啊”我是做知名品牌色谱柱销售的,在销售的过程中我发现很多客户对自己手中的色谱柱不熟悉,也就谈不上去爱护色谱柱,维护色谱柱。您说的“这么冲一下”的人大有人在,而这么冲过之后,一次可能侥幸没问题,但几次之后,色谱柱的寿命和柱效是大大降低的,因为这样报废的色谱柱也不在少数!只是很多化验员不知道,也怕担责不去提使用方法的事情罢了。一句话:很多色谱柱怕进“纯水”。因此针对高水相或纯水做流动相的实验,很多厂家开发了专用于纯水的色谱柱,比如**品牌的SB-AQ柱,bonus-rp柱。
色谱柱、色谱仪都不怕用,就怕不用,关键在于方法。
碳链是不容易溶解掉的,C18长链是化学惰性的,非常稳定,要说可能溶解的东西应该是硅胶基质,硅胶基质溶解了,C18长链没地方依附自然就脱落了。硅胶的一个溶解特点是:pH越大硅胶基质越容易溶解,在纯水条件下比流动相中含有一定比例有机相的条件下溶解度要大得多。因此用纯水来冲柱子的时候对柱子是有一定损伤的,一般不建议用纯水来冲柱子,特别是柱温比较高和pH较高的时候。虽然在纯水条件下溶解度比较大,但是也不会一下就冲坏掉了,不会有这么严重,只是说经常用纯水冲柱子会比不用纯水冲柱子稍微短一点而已,毕竟经常用纯水冲洗是个损耗填料的因素,长期累积结果是会有影响的。同时,通过封尾等方式也是可以降低水与硅胶基质接触的机会,大大削弱水对硅胶基质的溶解作用,延长色谱柱在纯水条件下的使用寿命,如Ultimate AQ-C18柱子就采用了双封尾的技术延长纯水相下的使用寿命。