主题：【求助】流动相中离子对试剂与缓冲溶液比例问题

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
北北，先各自配制好，再两两混合。

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原文由 huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:
请问zxhcnf版主，在HPLC的方法开发中，针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定，也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相，这二者是按1：1比例的混合吗？或者说这方面有什么规则？欢迎各位版友参加讨论。

在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

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请问zxhcnf版主，在HPLC的方法开发中，针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定，也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相，这二者是按1：1比例的混合吗？或者说这方面有什么规则？欢迎各位版友参加讨论。

在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

10mM？有点大吧，我认为在保证分离度的情况加的越少越好

原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:
在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

原文由 zxhcnf(zxhcnf) 发表:

原文由 huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:
请问zxhcnf版主，在HPLC的方法开发中，针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定，也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相，这二者是按1：1比例的混合吗？或者说这方面有什么规则？欢迎各位版友参加讨论。

在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

原文由 ruby70303(ruby70303) 发表:

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请问zxhcnf版主，在HPLC的方法开发中，针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定，也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相，这二者是按1：1比例的混合吗？或者说这方面有什么规则？欢迎各位版友参加讨论。

在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

没用过四丁基溴化铵，也是用来改善峰形的吗？

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

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请问zxhcnf版主，在HPLC的方法开发中，针对流动相中缓冲盐和离子对试剂的比例如何确定，也就是说假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相，这二者是按1：1比例的混合吗？或者说这方面有什么规则？欢迎各位版友参加讨论。

在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

没用过四丁基溴化铵，也是用来改善峰形的吗？

它是阴离子对试剂，可以和阳离子形成疏水性的缔合物以便在反向色谱柱上保留

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在液相方法开发过程中，在流动相中加入缓冲盐主要有两个方面的考虑，1）利用其缓冲能力用于调节流动相的pH，使流动相的pH值在某一指定值的附近；2）增强流动相的离子强度，减少或削弱被分析化合物与固定相中硅羟基的相互作用，改善峰行；
在流动相中加入离子对试剂时最主要的一个目的就是，利用离子对试剂的两面性，既能在C18填料上有较好的保留，又能与强极性的被分析产生电性作用，增强化合物的保留能力；但是离子对试剂加入后化合物保留时间的变化对pH非常敏感，而离子对试剂本身并不能起一个有效的pH缓冲或稳定作用。为了使离子对试剂加入后保留时间相对稳定，因此需要在加入离子对试剂的同时也加入缓冲盐在流动相中来调节pH。
由于缓冲盐和离子对试剂易溶于水难溶于有机溶剂，因此缓冲盐和离子对试剂通常是先在同一容器中配成二者的混合水溶液，调节好pH后再使用，通常缓冲盐的浓度范围大约10～100mol/L,最常用的是20、30、50mmol/L，而离子对试剂10mmol/L通常是用得比较多的一个浓度。LZ所说的“假如用50mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液和10mmol/L四丁基溴化铵离子对试剂作流动相”，其配置方法我认为是，先准确称量好50mmol的磷酸二氢钠和10mmol四丁基溴化铵，然后二者一起加入到一个1000ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

没用过四丁基溴化铵，也是用来改善峰形的吗？

它是阴离子对试剂，可以和阳离子形成疏水性的缔合物以便在反向色谱柱上保留

原文由 luxw-卢(luxw) 发表:

原文由 huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:
北北，先各自配制好，再两两混合。

就是想知道二者的配比比例啊

不是顺序吗？
那就要慢慢试试啦，不过配比中是否是有大量泡沫出现啊？