主题：【极限体验】试用月旭后，不得不说。。。

期待更多的内容。

PITC法氨基酸测定方法验证
产品简介：产品就是人脑有问题拿猪脑来补一下，因为里面含有多种氨基酸，什么18种，24种具体我也没有数过，附带什么活性小肽等。。。有无效果，因为我脑子还能运行，没有用过，所以效果就不知道。
方案目的：就是替换方法，检验合格好发货，老板在叫啊。。。

方法描述：看了好多论坛，有很多人还是真心希望做好的。所以我还是正规并且好不保留的介绍给看我帖子的人，也希望不要被其它公司给忽悠呢！
仪器：a. 天平（精度0.1mg）；
c. 单标线吸管（5ml）；
d. 容量瓶（100ml. 250ml. 50ml）；
f. 试管（1.5×15cm，1.5×10cm）；
h. 微量进样器（10µl）；
i. 微量可调移液器（1000µl）及吸头；
j. 旋涡混匀器；
k. 恒温水浴锅；
l. HPLC系统及氨基酸分析柱（4.6×250mm）。

试剂：a. 超纯水（≥18MΩ∙cm）；
b. 乙腈（HPLC级）；
c. 三水合醋酸钠(分析纯/优级纯)
d: 醋酸(分析纯)
e. 异硫氰酸苯酯衍生试剂包（包括衍生试剂A、衍生试剂B、衍生试剂C溶液），衍生试剂包对身体有害，用时请做好防护措施。

流动相制备
流动相A: 0.1mol/L醋酸钠(取醋酸钠13.6g,加水约800ml使溶解,用水稀释至1000ml)-乙睛(93:7),用稀醋酸调pH值至6.5,用0.45µm滤膜过滤后备用。
流动相B: 乙睛-水(80:20), 用0.45µm滤膜过滤后备用。
冲洗液：甲醇（乙睛）-水(20:80), 用0.45µm滤膜过滤后备用
流动相梯度洗脱表：
    T(min)           A%        C%   
    0.01       100.0        0.0   
    11    93.0        7.0   
    13.9    88.0        12.0   
    14    85.0        15.0   
    29    66.0        34.0   
    32    30.0        70.0   
    35    0.0        100.0   
    42    0.0        100.0   
    45    100.0        0.0
    55    100.0         0.0

衍生
对照品溶液制备
取Waters公司提供的氨基酸对照品浓溶液进行10倍稀释作为对照品溶液（详见9.附注）；或精密称定中国药品生物制品检定所16种氨基酸对照品配制成同样浓度的对照品溶液。
供试品溶液制备
精密量取/称取供试品适量，并配制成相应浓度的溶液备用。
衍生步骤
将恒温水浴锅预热至50±1℃；
将衍生试剂从冰箱中拿出并放至室温；
精密量取上述对照品和供试品溶液1ml,置试管中,加入A溶液0.5ml,B溶液0.5ml,摇匀,在50±1℃水浴中加热45分钟,取出.加入C溶液1ml,振摇，并用孔径为0.45μm有机膜过滤,放置30分钟后,取澄清的下层液进行分析试验。
色谱条件
色谱柱：氨基酸分析柱（4.6×250mm）

流　速：1.0ml/min
柱　温：40℃
紫外检测波长：254nm
进样量：2.5μl
工作站记录时间：55min
测定
A、B通道全部用纯水排尽气泡，平衡系统。
设柱温40℃，流速1.0ml/min；
用20%甲醇（或乙腈）水溶液冲洗30分钟置换掉色谱柱保护液；
用流动相A平衡柱20min；
运行一次空白梯度（二次更好）。
进样分析：先进对照品溶液，后进样品供试液。上次样品走完与下次进样之间相隔应不超过3min。
冲洗
进样分析完毕后，关闭检测器，用20%甲醇（乙腈）水溶液代替流动相A，进水样分析，待梯度洗脱程序启动后，关闭检测器。
换100%水冲洗40min以上；
如果保存时间为3天或更少时，可用乙腈/水（80:20）冲洗20min；如果保存时间超过3天或不能确定时，用100%乙腈冲洗20min。
分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。
附注
Waters公司18种氨基酸对照液稀释10倍后，各氨基酸的浓度为：
Name    M.W.    C(mmol/L)    C(mg/ml)    Name    M.W.    C(mmol/L)    C(mg/ml)
门冬氨酸    133.10    0.25    0.03328    胱氨酸    240.30    0.125    0.03004
丝氨酸    105.09    0.25    0.02627    酪氨酸    181.19    0.25    0.04530
谷氨酸    147.13    0.25    0.03678    缬氨酸    117.15    0.25    0.02929
甘氨酸    75.067    0.25    0.01877    甲硫氨酸    149.21    0.25    0.03730
组氨酸    155.15    0.25    0.03879    赖氨酸    146.19    0.25    0.03655
精氨酸    174.20    0.25    0.04355    异亮氨酸    131.17    0.25    0.03279
苏氨酸    119.12    0.25    0.02978    亮氨酸    131.17    0.25    0.03279
丙氨酸    89.093    0.25    0.02227    苯丙氨酸    165.19    0.25    0.04130
脯氨酸    115.13    0.25    0.02878    色氨酸    204.23    0.25    0.05106

氨基酸色谱图：见图1.

出峰顺序：1.门冬氨酸；2.谷氨酸；。。。不记得了。。。17.赖氨酸
结果与分析：
1.线性关系与最低检测限；
2.回收率；
3.衍生物存放条件；
4.以前3批样品结果对比；
5.色谱条件通用性比较。

结论：整了半天，一句话：就是完全可以替代以前的方法作为我们公司质控手段。
结果与分析好了，明天再说，有点困了。

楼主介绍的很详细，支持，另外也说明“真金不怕火炼”