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液相色谱（LC）

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主题：【求助】关于HPLC测定法的吸收波长确定

浏览0 回复16 电梯直达

淮河木头

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发表于：2010/04/23 16:33:11 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果我要同时测定绿原酸和黄芩苷的含量，那么测定的吸收波长该怎么选择？
请高手指点！
在用DAD检测器对绿原酸扫描，在263nm处有最小吸收，在326nm处有最大吸收；黄芩苷在276nm处有最大吸收，在316nm处有一个较276nm处小一点的吸收峰，在299nm处有最小吸收。我初步考虑的是分别测定样品在263nm、276nm、299nm、316nm、326nm波长处的绿原酸和黄芩苷含量，然后考察在这5个波长处样品中绿原酸和黄芩苷的含量是否存在差异，然后再确定其吸收波长。
（1）这样做是否可行？
（2）在对测得的5个波长处绿原酸和黄芩苷含量数据进行处理时，使用什么统计方法？
（3）如果不在最大吸收波长处测定该物质，那么对测定结果有何影响？
（4）现在在国内或者国际上是否允许不在最大吸收波长处测定该物质含量？

请高手指点！
急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急急！
先谢谢了！

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2010/4/23 20:16:59 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你的做法是对的，选择5个当中最合适的一个做
都是你既然有DAD，为什么不用全波长扫描做呢
标准中也没要求一定要最佳吸收波长的

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有水有渝

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2010/4/23 20:43:54 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

要求最佳吸收波长做，但不一定是最大吸收波长，最适合的才是最好的。

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风肃

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2010/4/23 21:02:07 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

DAD收集200-400（700）nm全部数据，分别进空白和标准样品，三维谱图可以清晰地帮助你选择吸收波长。原则是：干扰物吸收尽量小，目标物尽量吸收尽量大！

推荐 326nm 276nm 同时采集不就可以啦，分别能得到分辨率高的色谱图！只要标准样品和试样在同样的采集参数下测试，对于结果的测定没有什么影响！

该帖子作者被版主 liwei7893加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励应助。

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毛毛儿

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2010/4/24 7:54:22 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

当测得混合物时，紫外波长的选择一般是比较折中的态度，就是选大家在这个波长下都有不是很低的紫外吸收，效果最好，就是兼顾所有！

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淮河木头

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2010/4/24 7:59:42 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zhufengdr(zhufengdr) 发表:
DAD收集200-400（700）nm全部数据，分别进空白和标准样品，三维谱图可以清晰地帮助你选择吸收波长。原则是：干扰物吸收尽量小，目标物尽量吸收尽量大！

推荐 326nm 276nm 同时采集不就可以啦，分别能得到分辨率高的色谱图！只要标准样品和试样在同样的采集参数下测试，对于结果的测定没有什么影响！

我的DAD是全波长扫描的，但是如果是制定质量标准的话，不是所有的仪器设备都带全波长扫描的，所以我就在想，在最大吸收波长处的含量和在最小吸收波长处的含量之间是否一样，根据考察结果来看，基本上没有差别。
现在就是有个问题，用什么统计方法来说明两者之间没有差别，换句话说测定波长可以不是该物质的最大吸收波长。
请高手指点！是不是仅仅计算偏差和标准偏差就行了吗？个人感觉总少了点什么。

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淮河木头

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2010/4/24 8:00:21 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

测得的数据用何统计方法进行处理，请高手指点！

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2010/4/24 8:25:38 Last edit by goog001

淮河木头

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2010/4/24 8:30:37 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

还有一点需要说明的，就是最大吸收波长并不是固定的，一般会有2-3nm变动，就像我第一天扫描绿原酸的最大吸收波长在326nm，第二扫描同一份对照品时（中间没有任何变动，仅仅是放置了不到20个小时）最大吸收波长为327nm。

所以说，个人认为测定波长不一定为最大吸收波长，但是你选择非最大吸收波长时，要说明你选择该波长的理由。

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