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主题：【求助】分离RNA和小分子有机物

浏览0 回复8 电梯直达

zhushu0602

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发表于：2010/07/03 00:30:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请教各位大侠，我是搞临床的，但现在我实验要将一共42个BP的双链RNA分子和N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]分开，量很少，都是微克级别，该用什么方法好?拜谢！

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2010/7/7 15:32:07 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zhushu0602(zhushu0602) 发表:
请教各位大侠，我是搞临床的，但现在我实验要将一共42个BP的双链RNA分子和N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]分开，量很少，都是微克级别，该用什么方法好?拜谢！

您好！我对临床方面不太熟悉，但是42个BP的双链RNA分子分子量大概20000多，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]的分子量约200多，分子量差异较大，分离应该不成问题吧？我们有凝胶排阻的层析柱，理论上可以将差异较大的分子分开，原理是分子筛机理。最小规格是1mL的。

具体的您的样品是什么状态？期待得到的是RNA吧？除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]？分离主要难点是什么？如果能够告知详情，或许可以帮助您！

我们对临床方面不太了解，还请见谅！希望我可以帮到您！

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wust67

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2010/7/7 22:59:42 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

可以试试电泳。

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zhushu0602

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2010/7/8 19:52:16 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 amandali(amandali) 发表:
原文由 zhushu0602(zhushu0602) 发表:
请教各位大侠，我是搞临床的，但现在我实验要将一共42个BP的双链RNA分子和N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]分开，量很少，都是微克级别，该用什么方法好?拜谢！

您好！我对临床方面不太熟悉，但是42个BP的双链RNA分子分子量大概20000多，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]的分子量约200多，分子量差异较大，分离应该不成问题吧？我们有凝胶排阻的层析柱，理论上可以将差异较大的分子分开，原理是分子筛机理。最小规格是1mL的。

具体的您的样品是什么状态？期待得到的是RNA吧？除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]？分离主要难点是什么？如果能够告知详情，或许可以帮助您！

我们对临床方面不太了解，还请见谅！希望我可以帮到您！

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2010/7/8 19:54:56 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wust67(wust67) 发表:
可以试试电泳。

谢谢您的意见，我产物量太少，我担心电泳不好回收。

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amandali

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2010/7/9 14:15:04 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢您的帮助，我实验室这样的siRNA-NH2，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH(不知道怎么读)的混合物，我要除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，分别得到两个含siRNA的产物。实在没想出办法能把两个含siRNA的产物分开，万般无奈之下才打算只分N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]。您能指导下怎么把三者分开吗？如果没办法，那么用凝胶排阻层析，具体您有什么推荐吗？

RNA和小分子，由于分子量差异较大，可以采用凝胶排阻层析柱，两个RNA分子量相近，只能依靠两个RNA的亲疏水性差异来分了，利用疏水层析法，将两个RNA分开，应该用苯基层析柱可以。不过，这个只是理论上的分析，需要实际操作，试验一下，不知道有没有查过相关文献？文献上应该会有此方面的办法吧？

假如其中一个RNA有特异性亲和配体，也可以用亲和柱来纯化。

您的样品是什么？样品量多少？方便告知？

仅供参考！

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2010/7/9 21:01:50 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 amandali(amandali) 发表:
谢谢您的帮助，我实验室这样的siRNA-NH2，N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH(不知道怎么读)的混合物，我要除去N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]，分别得到两个含siRNA的产物。实在没想出办法能把两个含siRNA的产物分开，万般无奈之下才打算只分N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]。您能指导下怎么把三者分开吗？如果没办法，那么用凝胶排阻层析，具体您有什么推荐吗？

RNA和小分子，由于分子量差异较大，可以采用凝胶排阻层析柱，两个RNA分子量相近，只能依靠两个RNA的亲疏水性差异来分了，利用疏水层析法，将两个RNA分开，应该用苯基层析柱可以。不过，这个只是理论上的分析，需要实际操作，试验一下，不知道有没有查过相关文献？文献上应该会有此方面的办法吧？

假如其中一个RNA有特异性亲和配体，也可以用亲和柱来纯化。

您的样品是什么？样品量多少？方便告知？

仅供参考！
我样品是siRNA-NH2，siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH和N -琥珀酰亚胺- 3 - [4 -羟基苯丙酸]的混合物。混合物中siRNA-NH2和siRNA-NH-CO-CH2-CH2-C6H4-OH一共最多10nmol。
目前没人这样做过，所以没查到文献。两种siRNA的亲和性是一样的。
您推荐的苯基层析柱是用于HPLC的吗？能推荐一下具体方法吗？
谢谢！

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