主题：【讨论】关于黄曲霉毒素等的检测

(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法
　　免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素B1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和HPLC法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.
　　免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点,同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.
　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高 ,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (B1B2G1G2) 的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.
　　黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.
　　分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.

(2) 酶联免疫吸附法:
　　1996年,Nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1.
　　原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.
　　(3) 微柱筛选法 可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量.
　　原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量.
　　(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法
　　一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.

以上是我从网络上搜索的资料，不知道大家有没有正在做此方面的检测的？主要检测的样品是什么？有哪些问题？欢迎讨论！互相切磋！

我正在做呢，做的样品量挺多的，光免疫亲和柱一买就六盒共24000元。做的是食用油，包括花生油、芝麻油、大豆油等等，还有各种花生米。
有个小问题请教下：一定比例的甲醇水提取后，过滤到亲和柱上样，上样完成后进行淋洗，淋洗完成后怎样使得亲和柱干燥？跟普通的固相萃取柱一样吹干吗？会不会有影响？毕竟这是生物柱啊！如果没有吹干会导致里面有水分残留对定量不准确（1ml洗脱进样），吹干的话影响也很大,里面的填料都塌了。。。

我来回答楼上的问题，根据我的经验，一般的话在淋洗完成之后用一次性的针管打半管到一管空气，然后再轻轻甩甩就差不多了，如果用的是固相萃取装置就吹或者抽1-20秒，然后就加甲醇洗脱就行了，因为你在很短的时间里就完成淋洗，洗脱整个过程，所以问题不大。
    其实你这个问题的关键点还是在于个人的实验操作，在测样的时候最好是每个样品的操作时间和过程都差不多就好。
    没有绝对准确，只有相对准确，这完全在于你个人。
    价格的话，国产的要便宜一些，真菌毒素免疫亲和柱尤其是黄曲霉毒素免疫亲和柱已经做了很多年了，技术比较成熟，国产的做也是没问题的。