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主题：【讲座】迪马科技技术讲座——梯度洗脱

浏览0 回复72 电梯直达

风肃

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2010/7/11 14:06:50 31楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看完才知道很多不懂，豁然开朗！希望楼主定期开展类似的讲座！

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xue2009

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2010/7/11 22:12:27 32楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

为什么梯度相比等度影响灵敏度？在等度出的很低的峰在梯度却可以出的较高。还有一个未知样品你讲的是有机相比例从5%-100%先试着做做。我觉得还是先用纯有机相走比较好，这样大致确定下时间，为调整梯度打基础。

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xue2009

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2010/7/11 22:15:18 33楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对于你说的“样品溶液中同时含有目标化合物和强保留化合物”用梯度比较好，呵呵，我们一般都是保证目标样品出峰后就调整为100%有机相把强保留性组分洗脱出来，这样也省时。

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xue2009

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2010/7/11 22:27:01 34楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我还有听说过浓度梯度等一些其它的梯度不知道是怎么回事？望解释，谢谢

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xue2009

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2010/7/11 22:31:58 35楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

梯度变化速率降低，k*值增加，色谱峰的区域宽度增加，灵敏度下降；k*值增加能理解，后面的没理解。谢谢解答

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微雨燕双飞

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2010/7/12 9:14:50 36楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xue2009(xue2009) 发表:
为什么梯度相比等度影响灵敏度？在等度出的很低的峰在梯度却可以出的较高。还有一个未知样品你讲的是有机相比例从5%-100%先试着做做。我觉得还是先用纯有机相走比较好，这样大致确定下时间，为调整梯度打基础。

答：
这有针对保留因子相差较大的一组化合物分析时，梯度洗脱才能给出较好的灵敏度，原因如下：如果采用低洗脱强度的流动相，那么强保留组分出峰较晚，峰展宽严重，响应值降低，所以灵敏度不高；如果采用高洗脱强度的流动相，强保留组分也较早出峰，此时虽然峰响应值高，但一般分离度不好；梯度洗脱时，流动相组成是连续变化的，起初洗脱强度低，没有化合物流出，随着流动相洗脱强低逐渐增大，化合物的保留因子也逐渐降低，化合物逐渐被洗出，在这一过程中，化合物的保留因子是变化的，每一组分被洗脱出来时，其平均保留因子很小(一般处于2~5之间)，所以峰展宽较小，灵敏度也很高。
对于您第二点说法，也许是见仁见智，各有妙招。

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微雨燕双飞

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2010/7/12 9:15:37 37楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xue2009(xue2009) 发表:
对于你说的“样品溶液中同时含有目标化合物和强保留化合物”用梯度比较好，呵呵，我们一般都是保证目标样品出峰后就调整为100%有机相把强保留性组分洗脱出来，这样也省时。

答：这也是梯度洗脱，难道不是吗？

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2010/7/12 9:23:49 38楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xue2009(xue2009) 发表:
梯度变化速率降低，k*值增加，色谱峰的区域宽度增加，灵敏度下降；k*值增加能理解，后面的没理解。谢谢解答

答：保留因子增大，色谱峰的区域宽度增大，“色谱峰区域宽度”是峰宽的标准说法，这句话简单说就是k*值增，峰宽也增加。根据塔板理论，化合物的保留因子增大，流出色谱柱时其分布的塔板数量就越多，色谱峰峰宽更大。梯度洗脱时与等度洗脱时均如此。

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chqiu111111

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2010/7/12 9:56:44 39楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

好东西，用得着！

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微雨燕双飞

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2010/7/12 10:04:42 40楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xue2009(xue2009) 发表:
我还有听说过浓度梯度等一些其它的梯度不知道是怎么回事？望解释，谢谢

答：您这个问题没有语境，很难判断“浓度梯度”的具体含义。在这里我把色谱分析中可能遇到的“浓度梯度”说一下：
浓度梯度是指同一介质的不同位置或当介面两侧溶液间存在浓度差时，高浓度侧与低浓度侧的溶质在空间上的分布是均匀递减的，此种浓度差在空间上的递减称为浓度梯度。色谱分析中，进样以后往往存在浓度梯度，浓度梯度的存在会促使样品分子在三维空间内扩散，进而导致色谱峰展宽，这就是速率理论中的分子扩散项。液相色谱中由于流动相是液体，化合物在其中的扩散比较缓慢，所以分子扩散项影响不显著；气相色谱中流动相是气体，化合物在其中的扩散比较迅速，分子扩散项些影响显著。

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