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凝胶色谱（GPC）
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主题：【讨论】凝胶色谱如何改善肩峰？

浏览0 回复6 电梯直达
zqy0797
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发表于：2010/07/09 16:27:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我现在做一个多肽的高分子蛋白质及含量测定。色谱条件是 色谱柱：TOSOH　Ｇ２000　流速0.６　波长　２１４　

流动相　0.063mol/L Pb：异丙醇＝９７：３　

现在主峰前出现一个小包也就是肩峰　我想知道怎么改条件能让他们分开呀？因为反相做的比较做　分子筛做的比较少。

色谱条件如何优化呢？请大家指点啊！
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tigertooth
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2010/7/12 11:14:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
改改流动相条件试一试，但也不一定分得开，因为蛋白易聚集。
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小不董
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2010/7/13 17:12:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以增加有机相的比率，再就是你要确定样品是否会出现比目标物的分子量稍大的物质？如果样品中的分子量分布的确如现在一样，改变条件也是没有用的。再就是看你用的什么检测器?如果可以增加紫外或DAD检测器，多一点信息看是否是杂质，再考虑是否可以用其他办法把杂质峰分开。但凝聚色谱不是化学键作用来分离，凝胶色谱要避免所有的键作用，只按分子大小来出峰的。
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wanttofly
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2010/7/14 10:38:46 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
,不知道蛋白质,只不过玩了2天凝胶色谱,随便说说.用惯普通液相再用凝胶,怎么都感觉是既简单又粗糙
凝胶色谱跟液相色谱不同,是测定分子量,所以根本不需要考虑把2个峰分开,如果确实有2个独立的峰,意味着有2个分子量分布,且这2个分子量分布不重叠(相差可能是数量级).
做他们合成的高分子,最理想的应该是一个正态分布峰,看过有人控制合成条件来得到双分子量物质的谱图,2个尖而已,根本不太可能像色谱那样基线分离,只有窄标的混标才是一个个分离的峰呢
该帖子作者被版主 doxw0323加 2积分， 2经验，加分理由：积极回答板油的问题。欢迎常来。
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小不董
doxw0323
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2010/7/14 13:56:07 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
蛋白质特别容易变质，变性，不是很好做。溶液要求比较严，另流速也控制，不能太大。
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crystal_cc_ice
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2010/8/6 10:32:29 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果要用凝胶色谱来分离，只要确定好收集时间就行了，没有必要追求特别完美的峰，呵呵，个人意见
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芝兰
luqinhua
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2010/8/31 20:31:06 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
增加柱长，如两根柱子串联，可改进分离。
或者改变盐浓度，也可改进分离，这主要和蛋白质在溶液中的分子状态有关。
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