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主题：【讨论】【月底大奖大讨论】【200积分奖励】如何快速确定激发和发射波长？

浏览0 回复32 电梯直达
pfz1985
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发表于：2010/07/25 09:50:59 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在科研中，对于一种未知的荧光物质，我们如何能快速确定其激发和发射波长？
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zhouyuhu
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2010/8/10 23:00:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过，是否和紫外一样，配置一个PPM级的，进行扫描？
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water666
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2010/8/11 11:08:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用荧光光谱仪就可以做到的。先可以试几个波长激发扫出发射峰位置。再用这个发射波长扫激发就找到了激发波长。就OK了。
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zwyu
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2010/8/11 11:44:03 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有的厂商的软件中有“预扫描”功能，能自动给出激发、发射波长的建议值。一般对液体样品挺好用的，固体的话就不行。
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锐飏
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2010/8/11 16:35:54 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
当然是用3D扫描去确定啦
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teng1986
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2010/8/17 15:52:56 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不建议用预扫描功能，很多时候给的并不是被测物质的荧光峰。如果3D扫描功能就简单了，做个3D扫描，其中荧光峰位置不随激发波长变化的差不多就是被测物质的，然后用该发射峰波长做激发光谱扫描，再用得到的激发波长做发射光谱扫描。几个来回一般就可以找到。
假如没有3D功能，就只能用笨方法了，先做紫外扫描，找到一个或几个吸收波长，以此为依据，在固定的间隔波长下做多个发射光谱扫描，同理，荧光峰不随激发波长改变的一般就是啦。
要注意排除散射，杂散光。
个人意见，不对的地方欢迎纠正，呵呵。
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夕阳
anping
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2010/8/17 20:00:08 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
采用三维扫描方式为正解
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swimming2345
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2010/8/18 10:03:58 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首选3D扫描，但时间较长。
如果仪器没有3D功能的话，最好的方法是采用0nm激发功能，确定最大发射波长（即固定激发波长为0nm，再做发射扫描），然后定最大发射波长，再回扫激发波长，确定最大激发波长。最后，再重新在最大激发波长处扫描发射光谱，确定最大发射波长（此最大发射波长和最先找到的最大发射波长会有所偏差）。以后面确定的最大发射波长为准。
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锐飏
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2010/8/18 11:38:01 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 swimming2345(swimming2345) 发表:
首选3D扫描，但时间较长。
如果仪器没有3D功能的话，最好的方法是采用0nm激发功能，确定最大发射波长（即固定激发波长为0nm，再做发射扫描），然后定最大发射波长，再回扫激发波长，确定最大激发波长。最后，再重新在最大激发波长处扫描发射光谱，确定最大发射波长（此最大发射波长和最先找到的最大发射波长会有所偏差）。以后面确定的最大发射波长为准。

我觉得反而用250nm，280那么，或是350nm几个点去尝试更方便。不知0nm是什么道理哈
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happydog2004
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2010/8/21 22:39:33 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议采用三维荧光光谱扫描，一次扫描可得“激发波长-发射波长-荧光强度”三维光谱图谱，可利用软件分析将其调整为等高线图谱，等高线圆圈较密集的可找到目标物质的激发波长和发射波长。
此外，还可通过“激发波长/发射波长-荧光强度二维荧光光谱”、“紫外-可见吸收光谱”进一步验证激发波长。理论上，物质在该波长处受光激发，发射荧光，则物质在该波长处定有吸收；反之，物质在该波长处有吸收，但不一定能够受该波长的光激发，从而发射荧光。
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2010/8/21 22:43:23 Last edit by happydog2004
liu22spoh
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2010/9/17 16:49:53 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先谢谢各位发言的大侠们！
这几天我就在做这个试验，不知道那是啥荧光物质。
之前没听说过荧光3d扫描，呵呵，还望各位告知一下都有那些品牌的相关仪器。
昨天用激发和发射光谱（300-700nm）的方式来做，发现问题很不少。
1，先在分光光度计上，检测全波长吸收曲线，发现在560nm处有最大的吸收峰，其他波长处基本上没有吸收，这是不是说明这个荧光物质的最大激发波长为560nm呢？
2，我权且把它的最大激发波长当作560nm，结果发现，检测发射光谱的时候，510nm-610nm这个范围之内的发生光均特别大，而峰值依旧在560nm，这是什么原因呢，因为反射光没有被屏蔽掉？我以490nm作为激发光，检测FITC的发射光谱，发现还是490nm两边的发射光信号呈正态分布。
3，为了确保仪器的有效性，我拿FITC做了一下扫描，以700nm作为发射光时，最大的激发波长为490nm；而以750nm为发射光时，最大的激发波长却不是490nm，偏差还蛮大的，这是什么原因呢？
还望大家不吝赐教啊！
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